细胞生物学第十二章细胞周期与细胞分裂.pptVIP

第十二章：细胞周期与细胞分裂 细胞增殖是生命的基本特征，种族繁衍、个体发育、机体修复等都离不开细胞增殖。 初生婴儿有1012个细胞，成人1014个，约200种类型。 成人体内每秒钟有数百万新细胞产生，以补偿衰老和死亡的细胞。 一个大肠杆菌若按20分钟分裂一次，并保持这一速度，则两天即可超过地球的重量。 12.1 细胞周期(cell cycles) 由细胞分裂结束到下一次细胞分裂结束所经历的过程，叫细胞周期(图)。 12.1.1 细胞周期时相及类型 不同类型细胞周期时间不完全相同, 细胞分裂状态也各有异. ■细胞周期的时相,分为4个期： G1期(gap1) S期(synthesis phase) G2期(gap2) M或D期(mitosis or division) 在细胞周期的不同阶段中, 生化合成反应是不同的。 ■ G1期 此期主要合成rRNA、蛋白质、脂类和碳水化合物。 G1期进入S期与S期激活因子有关。 ■ S期 在S期, 组蛋白的mRNA水平可增加50倍。即 DNA和组蛋白的合成在时间上是同步的。实验证明没有组蛋白的合成, DNA的复制就会停止。 常染色质先复制，异染色质后复制。 ■ G2 期 此期 主要大量合成ATP、RNA、蛋白质, 包括微管蛋白和成熟促进因子MPF(maturation promoting factor)等，为有丝分裂作准备。 ■ 有丝分裂期(M 期) 从细胞分裂开始到结束所经历的过程, 也就是从染色体的凝缩、分离到平均分配到两个子细胞为止。 这一期的特点是RNA合成停止, 蛋白质合成减少, 以及染色体高度螺旋化。 ■ 细胞周期和细胞类群 根据细胞的分裂行为, 可将真核生物细胞分为三类: ● 持续分裂细胞(周期性细胞) 即在细胞周期中连续运转的细胞，如表皮细胞等。 ● 终端分化细胞, 即永久性失去了分裂能力，多为高度特化的细胞, 如哺乳动物的红细胞、肌细胞等。 ● G0细胞,又称休眠细胞，暂时脱离细胞周期,但在某些条件的诱导下重新进入细胞周期。如肝细胞。 12.1.2 细胞周期的研究方法 概念：培养物中所有细胞都处于细胞周期的相同阶段,称为细胞的同步化. 方法：自然同步化和人工同步化。 自然同步化： 1、多核体：如：粘菌、疟原虫。 2、某些水生动物的受精卵：如海胆、海参、两栖类。 3、增殖抑制解除后的同步分裂：如真菌的休眠孢子移入适宜环境后，它们一起发芽，同步分裂。 常用人工同步化方法：选择同步化、诱导同步化 诱导同步法（p394） 控制培养条件, 将非同步培养中的所有或大部分细胞暂时性地阻止在细胞周期的某个阶段, 最终使所有细胞达到同步化生长。 ● 胸腺嘧啶阻断技术：高浓度胸腺嘧啶能够阻断DNA合成所需的核苷酸的合成，此法可获得G1/S期同步化的细胞。 ● 中期阻断法：某些药物如秋水仙素可抑制微管的聚合, 将细胞阻断在有丝分裂的中期。 选择同步法（p393） 用物理方法将处于细胞周期中同一阶段的细胞从非同步的群体中分离出来。 ● 有丝分裂选择法： M期细胞与培养皿的附着性低，振荡脱离器壁收集。此法的优点是不受药物的影响, 同步化程度高, 不足之处是分离的细胞少, 手续繁琐。 ● 细胞沉降分离法： M期细胞体积大，可用离心分离。优点：可用于任何悬浮培养的细胞。缺点：同步化程度较低。 细胞周期时间的测定（p390） ●标记有丝分裂百分率法（percentage labeled mitoses，PLM）： 对测定细胞进行脉冲标记、定时取材、利用放射自显影技术显示标记细胞，通过统计标记有丝分裂细胞百分数的办法来测定细胞周期。 从更换培养液开始到开始出现标记有丝分裂器开始的这一段时间即为TG2。 从开始出现有丝分裂标记细胞到PLM达到最大时这段时间即为TM。 从开始出现有丝分裂标记细胞到PLM由最高值开始下降的这段时间即为TS。 两次开始出现有丝分裂细胞的时间间隔即为TC。 TG1=TC－TG2－TS－TM。 ●流式细胞分选仪测定法 原理：G1和G2/M期含有固定的DNA量，分别为1C和2C。S期细胞位于两者之间。 应用流式细胞分选仪测定细胞周期，可以通过监测细胞DNA含量在不同时期的变化从而确定细胞周期时间的长短。 评价：最先进，最方便 但流式细胞分选仪价格昂贵，严重制约该方法的应用。 细胞周期的关卡(check point) 细胞周期的运转是十分有序的, 是基因有序表达的结果。 细胞分裂基因表达的有序性, 受到一些控制系统的监测。使细胞周期事件的发生、发展过程严格按程序进行。? ■ 细胞周期中的三个主要关卡 在典型的细胞周期中, 控制系统至少有三个关卡: G1关卡(S