实验三酶的特性.pptVIP

实验三酶的特性 实验目的 酶是生物催化剂，是具有催化功能的蛋白质，生物体内的化学反应基本上都是在酶催化下进行的。通过本实验了解酶催化的高效性、特异性以及pH、温度、抑制剂和激活剂对酶力的影响，对于进一步掌握代谢反应及其调控机理具有十分重要的意义。 加深对酶的性质的认识：本实验由温度对酶活力的影响；PH对酶活力的影响；酶的激活剂及抑制；酶的专一性4组实验组成。 （一）温度对酶活力的影响 实验原理 酶的催化作用受温度的影响。在最适温度下，酶的反应温度最高。大多数动物酶的最适温度为37～40℃，植物酶的最适温度为50～60℃。酶对温度的稳定性与其存在形式有关。有些酶的干燥制剂，虽加热到100℃，其活性并无明显改变，但在100℃的溶液中却很快地完全失去活性。低温能降低或抑制酶的活性，但不能使酶失活。 实验材料 4个烧杯、4支试管、4支滴管、2只酒精灯、2只三脚架、2个石棉网、4根玻璃棒、4支温度机、火柴、开水、清水、冰块、1%淀粉溶液、碘液、唾液淀粉酶 试验流程 准备标号为1—5的5支试管，各加入1%淀粉溶液1ml 将标号为1的试管水溶液保持室温，再加入唾液淀粉酶，摇匀加入碘液，观察其呈色反应 将标号为2、3、4、5的试管淀粉溶液保持4℃、40℃、60℃、80℃水浴恒温，加入唾液淀粉酶，摇匀加入碘液，观察其呈色反应。 预期结果 最合适淀粉酶的温度为40℃ （二）PH对酶活力的影响 实验原理 酶活性受环境pH的影响极为显著。通常各种酶只有在一定的pH范围内才表现它的活性，一种酶表现其活性最高时的pH值，称为该酶的最适pH。低于或高于最适pH时，酶的活性逐渐降低。不同酶的最适pH不同。本实验观察pH对唾液淀粉酶活性的影响，唾液淀粉酶的最适pH约为6.8。酶的活性同时还受底物性质和缓冲液性质的影响。例如，唾液淀粉酶的最适pH约为6.8，但在磷酸缓冲液中，其最适pH为6.4～6.6，在醋酸缓冲液中则为5.6。 试剂： 0.3%氯化钠的0.5%淀粉溶液（新鲜配制） 稀释200倍的新鲜唾液 0.2M磷酸氢二钠溶液 0.1M柠檬酸溶液 碘化钾-碘溶液 器材： 试管与试管架 移液枪（1000微升） 锥形瓶（50毫升）×8 烧杯（100毫升） 白瓷板 恒温水浴锅 滴管 秒表 试验流程 取8个50毫升锥形瓶，编号。按上表中的比例，用吸量管添加0.2M磷酸二氢钠溶液和0.1M柠檬酸柠檬酸溶液，制备pH5.0～8.0的8种缓冲溶液。 取9支干燥的试管，编号。将8个锥形瓶中不同的pH的缓冲液各取3ml，分别加入相应的号码（1-8号）的试管中。然后，再向每个试管中加入0.5%淀粉溶液2ml。第9号试管与第5号试管的内容物相同。 向第9号试管中加入稀释200倍的唾液2ml，摇匀后放入37℃恒温水浴中保温。每隔1分钟由第9号试管中取出一滴混合液，置于白瓷板上，加一滴碘化钾-碘溶液，检验淀粉的水解程度，待结果呈橙黄色时，取出试管，记录保温时间。注意，掌握第9号试管的水解程度是本实验成败的关键之一。 以1分钟的间隔，依次向第1至第8号试管中加入稀释200倍的唾液2ml，摇匀，并以1分钟的间隔依次将8支试管放入37℃恒温水浴中保温。然后，按照第9号试管的保温时间，依次将各管迅速取出，并立即加入碘化钾-碘溶液2滴，充分摇匀。观察各管的呈现的颜色，判断在不同的pH值下淀粉被水解的程度，可以看出pH对唾液淀粉酶活性的影响，并确定其最适pH。 数据处理 ： 9号管所用的时间为 3 min （三）唾液淀粉酶的活化和抑制 实验原理 酶的活性受活化剂或抑制剂的影响。氯离子为唾液淀粉酶的活化剂，铜离子为其抑制剂。 实验器材及试剂 器材： (1)恒温水浴 (2)试管及试管架 试剂： (1) 0.1％淀扮溶液 (2)稀释50倍的新鲜唾液 (3)1％氯化钠溶液 (4)1％硫酸铜镕液 (5)1%硫酸钠溶液 (6)碘化钾—碘溶液 实验流程 （四）酶的专一性 实验原理 酶具有高度的专一性。本实验以唾液淀粉酶和蔗糖酶对淀粉和蔗糖的作用为例，来说明酶的专一性。 淀粉和蔗糖无还原性，唾液淀粉酶水解淀粉生成有还原性的麦芽糖，但不能催化蔗糖的水解，蔗糖酶能催化蔗糖水解产生还原性葡萄糖和果糖，但不能催化淀粉的水解，用Benedict 试剂检查糖的还原性。 实验器材及试剂 器材： 恒温水浴、沸水浴、试管及试管架 试剂： (1)2％蔗糖溶液 (2)溶于0.3%的氯化钠的1％淀粉溶液 (需新鲜配制) (3)稀释50倍的新鲜唾液 (4)蔗糖酶溶液 (5)Benedict氏试剂 蔗糖酶的专一性 * * 2 3 4 5 1 碘液 淀粉酶 1 2 3 4 5 4℃ 4