应用甲基化基因检测技术分析前列腺癌中HIC1的甲基化状态.pdf

中国癌症杂志 2016年第26卷第4期 《 》 290 CHINA ONCOLOGY 2016 Vol.26 No.4 应用甲基化基因检测技术分析 前列腺癌中HIC 1的甲基化状态 1 2 1 1 1 1 单孟林 ，丁　滔 ，郑江花 ，程增辉 ，郭　颖 ，夏前林 1. 复旦大学附属公共卫生临床中心医学检验科，上海 201508 ； 2. 上海交通大学附属第六人民医院南院泌尿外科，上海 200233 　　［摘要］　背景与目的：癌高甲基化基因1(hypermethylated in cancer 1，HIC 1)因表观遗传甲基化修饰导致 其在多种癌细胞和组织中表达沉默，可能与肿瘤的发生、发展有关。而这一现象在前列腺癌研究中的报道甚 少。该研究采用甲基化基因检测技术对前列腺癌中HIC 1启动子进行甲基化状态分析。方法：采用甲基化特异 性聚合酶链式反应(methylation-specific polymerase chain reaction，MSP)和亚硫酸盐测序PCR(bisulfate sequencing PCR，BSP)技术，对前列腺癌细胞PC3、C4-2B和正常前列腺上皮细胞PrEC，以及前列腺癌组织标本和正常前 列腺穿刺标本，进行HIC 1启动子甲基化分析；并使用去DNA甲基化酶5-Aza-CdR处理PC3、C4-2B和PrEC，经 反转录PCR(reverse transcription-PCR，RT-PCR)和蛋白［质］印迹法(Western blot)分析HIC 1在基因水平和蛋白 质水平上的变化。结果：MSP分析结果发现，在PC3、C4-2B和PrEC中HIC 1甲基化率分别为78.23%、72.15%和 10.63%，差异有统计学意义(P0.05)。对36例人前列腺癌实体瘤和36例人前列腺正常穿刺组织进行BSP测序， 统计显示，甲基化率分别是80.30%和31.56%。5-Aza-CdR处理后的PC3、C4-2B和PrEC经RT-PCR和Western blot 分析发现，与未处理对照相比，HIC 1转录水平和蛋白水平表达均显著上调。结论：在前列腺癌中，抑癌基因 HIC 1启动子呈高度甲基化状态并出现表达沉默或下调，可作为前列腺癌的早期预测指标和潜在的治疗靶点。 　　［关键词］　甲基化特异性PCR；亚硫酸盐测序PCR；前列腺癌；癌高甲基化基因1；甲基化 　　DOI: 10.3969/j.issn.1007-3969.2016.04.002 　　 中图分类号：R737.25　　文献标志码：A　　文章编号：1007-3639(2016)04-0290-07 Detection of HIC 1 promoter methylation in prostate cancer using MSP and BSP methods SHAN Menglin1 2 1 1 1 1 , DING Tao , ZHENG Jianghua , CHENG Zenghui , GUO Ying , XIA Qianlin (1.Department of Laboratory Medicine, Shanghai Public Health Clinical Center,