江苏省建湖地区肠出血性大肠杆菌O157∶H7监测分析.docVIP

江苏省建湖地区肠出血性大肠杆菌O157H7监测分析 【摘要】 目的 了解建湖地区腹泻患者肠出血性大肠杆菌O157H7感染情况，家禽、家畜O157H7带菌情况，水源水中O157H7污染情况。 方法 在2008年5月—9月采集腹泻患者和家禽、家畜的粪便以及水源水、肉制品、苍蝇等标本计836份，应用免疫磁珠浓集、山梨醇麦康凯琼脂（SMAC）分离、生化和血清学反应进行鉴定。结果 共检出肠出血性大肠杆菌O157H7 阳性标本17份，其中腹泻患者阳性率为1.15%，4种动物粪便、肉制品均检出阳性标本，但水、苍蝇标本中均未检出阳性。菌株对青霉素耐药性最高，达100%，对其他受试抗生素均敏感。结论 该地区腹泻患者和家禽、家畜中存在肠出血性大肠杆菌O157H7感染，且具潜在的流行性危险。 【关键词】 大肠杆菌O157H7；免疫磁珠分离法；监测；分析 O157H7是肠出血性大肠杆菌（enterohe-morrhagic Escherichia coli, EHEC）的一个主要血清型，主要引起人的食源性疾病，以突发性腹痛、水样便、血痢为主要症状，发热或不发热，严重时呈出血性肠炎甚至溶血性尿毒综合征。近20余年来，该菌引发的食物中毒在世界各地都有不同规模的暴发流行，我国自1987年在江苏徐州市检出首例E. coli O157H7以来，许多地区都开展了相关的监测工作。建湖县位于苏中、苏北交汇处，为了解E. coli O157H7在该县腹泻患者及家畜、家禽中的感染情况，我们采用免疫磁珠分离法（IMS）集菌后分离，E. coli O157H7血清凝集阳性的菌株做生化鉴定和药敏试验，现报告如下。 1 材料和方法 1.1 标本来源 2008年5月至9月，采集建湖县、镇各级 医院 肠道门诊腹泻患者和当地养殖场动物粪便（每份不少于5 g，2 h内4冷藏送检）；采集腹泻患者家中的苍蝇5份，每份10只；采集鲜肉或熟肉制品250 g置于消毒封口袋内；无菌采集建湖县内30个自来水厂水源水152份，各500 ml。 1.2 实验材料 1．2．1 试剂来源 Dynabead抗E.coli O157免疫磁珠(挪威Dynal A.S公司)、科玛嘉(CHROMagar)O157显色琼脂、头孢拉定(C)、新生霉素(S)、亚碲酸钾(T)、mEC培养基、山梨醇麦康凯琼脂(SMAC),大肠埃希菌E. coli O157诊断血清、H7血清(兰州生物制品研究所)、大肠埃希菌E. coli O157指示菌等均由江苏省CDC微生物检验室提供。生化微量鉴定管、M-H药敏琼脂、M-H药敏肉汤、药敏纸片均由杭州天和微生物试剂有限公司提供。所有试剂均在有效期内使用。O157显色培养基由郑州生物制品有限公司提供。 1.2.2 试剂配制 1.2.2.1 10%新生霉素mEC增菌液 41 g mEC增菌培养基，加1000 ml重蒸溜水，摇匀溶解后，50 ml分装于100 ml三角烧瓶中，121高压灭菌15 min后加10%新生霉素10 μl。 1.2.2.2 CT-SMAC平板 50 g SMAC加1000 ml重蒸溜水摇匀，100水浴煮沸分装。115高压灭菌15 min，冷却至55左右时，加入50 μl 1 mg/L头孢拉定和50 μl 5 g/L亚碲酸钾，摇匀后浇平板。 1.2.2.3 细菌洗涤缓冲液（PBS-Tween20) pH 7.4 PBS加入Tween20，终浓度为0.005%，115高压灭菌15 min。 1.3 检验方法 1.3.1 mEC增菌 取腹泻患者和压碎的家畜、家禽粪样5 g，无菌条件下解剖的苍蝇10只，无菌条件下取25 g肉制品剪碎，分别接种到50 ml 10%新生霉素 mEC增菌液中，400 ml水样接种到100 ml 5倍浓缩的上述增菌液中摇匀，放37恒温摇床振荡培养6 h。 1.3.2 IMS富集 先将悬浮的E. coli O157免疫磁珠分装到1.5 ml的灭菌EP管中。轻轻摇动，使增菌物与磁珠充分混匀。30 min后，把EP管插到装有磁板的Dynal MPC-M架上，不断缓缓翻转支架作用10 min。吸去悬浮液。取下磁板，每支EP管加入1 ml pH 7.4 PBS-Tween洗涤液，盖上盖，缓慢翻转10 min，洗涤2次后，吸去洗液，最后用少量洗液重新悬浮富集了的磁珠。 1.3.3 分离鉴定 上述悬浮液充分混匀，分涂于2块CT-SMAC平板，37培养18～24 h，挑取中等大小不发酵山梨醇的无色半透明的菌落，点种到科玛嘉E. coli O157平板上，37培养18～24 h后，挑取紫红或微红菌落作革兰染色、血清凝集，阳性菌株作系统生化和药敏试验。 1.3.4 菌株确认 分离的菌株经形态染色、系统生化和血清学鉴定后送江苏省疾控中心