电针对局灶性脑缺血大鼠缺血区APP与Tau1蛋白表达的影响.docVIP

电针对局灶性脑缺血大鼠缺血区APP与Tau1蛋白表达的影响 作者：徐振华 许能贵 符文彬 刘健华 【摘要】 目的 探讨电针对缺血后脑白质损伤的保护机制。方法 采用热凝闭大鼠大脑中动脉致局灶性脑缺血模型，随机分为假手术组、缺血组和电针组，观察电针对脑缺血后6 h缺血区淀粉样前体蛋白(APP)、Tau1蛋白的影响。结果 电针组APP、Tau1蛋白的表达较模型组明显降低(P0.05)，与假手术组比较无明显差异(P0.05)。结论 早期电针对脑缺血后APP和Tau1 蛋白表达的增多有明显的抑制作用，可减少缺血对脑白质的损伤。 【关键词】 电针;脑缺血;脑白质;APP;Tau1蛋白 缺血性卒中是脑白质急性缺血性损伤的重要因素，卒中后脑白质损伤是神经功能障碍的重要原因〔1〕。脑白质区损伤可破坏神经元之间、皮质和皮质下中枢之间的信号传递，临床上可表现为感觉运动功能、视觉空间技能、联想能力与精神运动功能下降〔2〕。脑白质区损伤也可造成其神经纤维投射区的灰质损伤，脑白质损伤主要表现为少突胶质细胞的损伤和髓鞘破坏。脑白质具有缺血易损性，少突胶质细胞和髓鞘化的神经纤维对缺血性损伤极为敏感，在神经元不可逆性损伤之前已有皮质下白质的改变〔3〕。长期以来，脑缺血的基础和临床研究多集中于神经元或灰质的损伤反应上，而一直忽视对脑白质损伤的研究〔4〕，但是脑缺血后神经功能的最终恢复不仅依赖于对神经元和灰质的保护也有赖于对白质的保护。脑白质损伤有其独特的机制，因此有必要将脑白质损伤作为神经保护 治疗 的独立指标进行观察。脑缺血后受损的少突胶质细胞大量表达Tau1蛋白，轴突则表达淀粉样前体蛋白(APP)，因此可用免疫组化的方法对其进行标记〔5～7〕。本研究通过对脑缺血后轴突和少突胶质细胞的改变进行定量分析，探讨缺血后脑白质损伤及针刺的影响。 　 　1 材料与方法 　　1.1 动物分组 广州中医药大学动物实验中心SPF级Wistar大鼠60只〔合格证号No.0014065，许可证号SYXK(粤)，全部雄性，体重180～240 g，自来水喂养，饲用普遍颗粒型大鼠饲料(含蛋白23%，脂肪4.7%，钠盐0.24%)，动物房温度控制在18～26，光暗周期12 h。抽签法随机分为假手术组、模型组和电针组，每组10只大鼠。 　　1.2 制模方法 采用电凝闭大脑中动脉致局灶性脑缺血模型〔8〕。假手术组只作手术暴露大鼠大脑中动脉，不予凝闭，模型组造局灶性脑缺血模型，电针组造模后给予电针治疗。 　　1.3 治疗方法 电针组选取督脉经穴百会(GV20)、大椎(GV14)两穴，其定位参照大鼠的常用针灸穴位〔9〕:“百会”位于顶骨正中;“大椎”在第7颈椎与第1胸椎间，背部正中。以1寸毫针(0.3 mm×25 mm，苏州医疗用品厂生产)向后斜刺百会0.5寸(16.7 mm)，直刺大椎0.5寸，两穴接上电针(G6805,上海华谊仪器厂生产)，用疏密波，5～10次/s，强度以大鼠安静耐受为度，约2～3 V，时间30 min。其他两组大鼠在同等条件下饲养，未予任何处理。 　　1.4 观察指标与方法 　　1.4.1 神经运动功能体征的观察与评分标准 3组大鼠造模后6 h按时间段分别进行神经功能行为评分。评分标准参照Bederson和Belayev等〔10，11〕的方法，0分：行为完全正常，步态平稳;1分：提起鼠尾离开地面，非损伤侧前肢内旋、内收;2分：将大鼠置于地面，推动大鼠躯体检查两侧抗力，非损伤侧抗力下降;3分：将大鼠置于地面，观察其行走，只向一侧转圈;4分：无法站立或虽能站立但不能自行行走。评分越高，损伤越重。 　　1.4.2 APP、Tau1蛋白样品采集及处理 6 h后，随机取每组大鼠各6只用10%水合氯醛麻醉，心脏灌注固定，取脑组织放入4%多聚甲醛中，准备石蜡包埋及切片。大鼠脑组织石蜡包埋切片后进行相应的免疫组化染色。 　　1.4.3 免疫组织化学染色 APP、Tau1蛋白的免疫组织化学染色均严格按说明书操作。 　　1.5 图像分析及统计学处理 确定免疫标记的部位，应用ImagePlus6.0图像分析系统测定梗死周围区的光密度值(OD)，测定时首先明确阳性反应物的颜色范围，选定统一的色彩区域进行测量以避免非特异性染色所造成的误差，以OD除以照片面积算出平均光密度，进行半定量分析。数据以x±s表示，使用SPSS11.5软件包中单因素ANOVA 计算 法和最小显著性差异(LSD)检验法来进行均数的显著性检验。 　 　2 结 果 　　2.1 神经症状行为学体征的变化 假手术组大鼠神经行为学表现均正常，评分均为0分。大鼠的神经学评分6 h后模型组为(2.38±0.52)分，电针组为(2.13±0.64)分，大鼠多表现为一侧前肢内旋或内收，侧向挤压时损伤对侧肌