流式细胞(FACS)多色组合原则和工具及新染料介绍.pptVIP

多色组合原则和工具新染料介绍 多色组合原则 按照机器设置 染料的亮度与抗原表达相匹配 同种细胞的Marker染料重叠最小化 尽量避免联合使用带来的假阳性 如果可能，用红激光做自发荧光高的样本。 染料选择-按照机器设置 表达强弱- Antigen Density 荧光染料的强度 Example 荧光染料光谱重叠最小化 spectra viewer 光谱重叠会导致数据丢失 采用多激光激发减少重叠 双激发荧光染料 荧光染料可被不止1 laser激发，导致光谱重叠干扰，影响结果. AmCyan 可被 Violet（405nm) 和Blue（488nm) (FITC detector). PE-Cy5 可漏到 APC detector. 荧光染料选择 避免染料和其衍生物（ tandem-dye）在同一细胞上标记，或者选用更稳定的tandem-dye 由于 tandem-dye 降解会产生加阳性 补偿: Tandems New Tandems Are More Stable 染料选择 Eight-color for hematopoietic stem cell Eight-color for hematopoietic stem cell Eight-color for hematopoietic stem cell Six-color for hemat