关于胶回收.docVIP

胶回收 ????????一. 提高胶回收量的办法： ????????1） 增加电泳时的上样量。 ????????2） 电泳缓冲液用新鲜配制的。 ????????3） 切胶时尽量只切有条带的胶，减小切胶体积：含目的片断很少的胶就不要要了，不然影响回收率。 ????????4） 把切的两块或多块胶融化后，无论多大的体积都用一个管子，转移到同一个柱子上。 ????????5） 溶胶时所加的溶液可多一点，这样更有利于DNA与膜的结合，不过一般不要多余750ul。 ????????6） 胶回收的关键是通过柱子的溶液的盐浓度、酸碱性（电荷）和疏水性使DNA与柱子结合，因此，若电泳缓冲液的PH偏高，可在溶胶液中加入10ul（PH 5.0，3mol/L的 NaAC）；为了使DNA分子更好的拦截在膜上，可以添加30％异丙醇在加热溶解胶后的液体里。 ????????7） 加洗脱液之前，将柱子在室温放置几分钟（大约需10分钟），以使乙醇充分挥发。 ????????8） 最后少加些洗脱液，尽量减少回收体积，一般用30-50μl洗脱液洗脱（不能太少，否则无法浸湿膜反而不利于洗脱）；洗脱液滴在膜中央，以充分洗脱结合在膜上的DNA。 ????????9） 可以在加入洗脱液之后，可以在55度水浴5分钟或放在50度水浴10分钟以上再洗脱，或用封口膜密封4度过夜，第二天再离心回收，效果不错。 ?