克隆文库的构建及其在微生物分子生态学中的应用.pptVIP

D:重组DNA的转化和克隆 将cDNA与载体连接成的重组DNA导入到受体菌菌群中储存，每个受体菌都含有一段不同的cDNA。如果用到的载体为噬菌体时，含有cDNA的重组噬菌体还需要经过体外蛋白质外壳包装反应，才能成为具有侵染和复制能力的成熟噬菌体。 E:筛选鉴定cDNA 当获得了含重组DNA的宿主细胞时，即完成了基因的克隆。利用适当的鉴定和筛选方法，就可以从中找到携带所需要的目的基因片段的重组克隆体。 1.3 16SrDNA、18SrDNA文库 2.克隆文库的筛选和鉴定 2.1抗生素抗性，挑选出含有质粒的克隆。 2.2蓝白斑筛选，挑出带有插入片段的克隆。 2.3核酸杂交 2.4特异性免疫学检测 设计适用于蓝白斑筛选的基因工程菌为β-半乳糖苷酶缺陷型菌株。这种宿主菌的染色体基因组中编码β-半乳糖苷酶的基因突变，造成其编码的β-半乳糖苷酶失去正常N段一个146个氨基酸的短肽（即α肽链），从而不具有生物活性，即无法作用于X-gal产生蓝色物质。用于蓝白斑筛选的载体具有一段称为lacZ的基因，lacZ中包括：一段β-半乳糖苷酶的启动子；编码α 肽链的区段；一个多克隆位点(MCS)。MCS位于编码α肽链的区段中，是外源DNA的选择性插入位点。虽然上述缺陷株基因组无法单独编码有活性的β-半乳糖苷酶，但当菌体 蓝白斑筛选 中含有带lacz的质粒后，质粒lacz基因编码的α肽链