分子生物学实验报告论文.pdfVIP

山东大学分子生物学实验报告论文 利用强启动子随机插入策略构建瑞氏木霉 纤维二糖水解酶Ⅱ高产菌株 学院年级：2012 级泰山学堂生物取向 论文作者：赵杰瑞 （学号201217142012） 同组成员：何硕楠 吴晓康 于诚慧 指导教师：钟耀华 山东大学分子生物学实验报告 赵杰瑞 201217142012 利用强启动子随机插入策略构建瑞氏木霉 纤维二糖水解酶Ⅱ高产菌株 赵杰瑞，何硕楠，吴晓康，于诚慧 (泰山学堂，山东大学，济南，250100) 摘要 以瑞氏木霉（Trichoderma reesei）为代表的丝状真菌能够分泌大量的纤维 素酶用以降解纤维素。本课题通过利用强启动子构建纤维二糖水解酶 Ⅱ（CBH Ⅱ） 表达盒，并运用随机插入策略转化入瑞氏木霉，可以得到CBH Ⅱ高表达的重组菌 株，从而提高了CBHⅡ的产量和纤维素的降解效率。 关键词 瑞氏木霉 强启动子 纤维二糖水解酶Ⅱ（CBHⅡ） Constructing CBH Ⅱ-high-yield Trichoderma reesei strains by using strategy of random insertion of strong promoters Zhao Jierui, He Shuonan, Wu Xiaokang, Yu Chenghui (Taishan College, Shandong University, Jinan, 250100, China) Abstract Filamentous fungi represented by Trichoderma reesei can secrete abundant cellulose to degrade cellulose. Our project construct the expression cassette of cellobio- hydrolase Ⅱ(CBH Ⅱ) , using strong promoters, and then transform the cassette to Trichoderma reesei by using strategy of random insertion. This method can obtain CBH Ⅱ-high-yield recombinant strains and thus improves the yield of CBH Ⅱand the efficiency of cellulose degradation. Key words Trichoderma reesei strong promoters cellobiohydrolase Ⅱ(CBH Ⅱ) 工业真菌瑞氏木霉 （Trichoderma reesei）是一种能利用多种碳源和氮源生长 [1] 的腐生丝状真菌，具有产生多种初级和次级代谢产物的能力 ，且具有高达40g/L [2] 的强大分泌能力 。在瑞氏木霉的分泌蛋白中，外切纤维素酶CBH Ⅰ和CBH Ⅱ占总 分泌蛋白量的80%以上[3,4]。因而瑞氏木霉是生产纤维素酶的优秀菌株。 2 山东大学分子生物学实验报告 赵杰瑞 201217142012 降解纤维素的酶类主要包括三大类：内切纤维素酶（EG）水解纤维素内部的 糖苷键，通过攻击纤维素中的无定形区来促进纤维素的降解，这为纤维二糖水解 酶提供新的自由末端从而加速水解。外切纤维素酶即纤维二糖水解酶（CBH）作 用于链的两端，产物主要是纤维二糖。纤维二糖进一步被 β-葡萄糖苷酶（BGL） 水解成葡萄糖。前人的研究发现，在瑞氏木霉中CBHⅡ和EG Ⅱ是主要的纤维素酶。 因为瑞氏木霉的分泌蛋白中CBH Ⅱ含量很高，故本文采用强启动子随机插入策略 构建CBH Ⅱ高产菌株，以研