第2章基因工程6.pptVIP

第六节 动物基因工程 1 外源基因导入动物细胞的方法 2 动物基因工程的应用（乳腺生物反应器） 3 存在的问题 转基因动物（transgenic animal） 指利用人工方法将外源基因导入动物受精卵或早期胚胎细胞，使之与宿主基因组整合，并随细胞的分裂而增殖，从而将外源基因稳定遗传的工程化动物。 1982年：Palmiter等，华盛顿大学，超级小鼠（supermouse）。将大鼠生长激素基因导入小鼠受精卵，所生7只子代小鼠中有6只生长加快，体重明显增加。引起生物学界轰动。 转基因动物生产主要步骤 目的基因的选择； 将重组基因转入受精卵，常使用的方法有显微注射法、反转录病毒感染法、胚胎干细胞法、精子载体法、脂质体法等； 将转入了外源基因的受精卵植入同期发情的受体动物，在植入前完成整合胚胎的检测、筛选、建立ES细胞系； 对出生后基因整合、表达情况进行检测，对整合、表达的转基因动物进行育种试验，建立由成功转基因个体或群体组建的转基因系。 1 外源基因导入动物细胞的方法 进行转基因动物研究的基因转移方法有多种，如早期的畸胎癌细胞（teratocarcinoma cell,TCC）植入法、逆转录病毒感染法、显微镜注射法、脂质体载体法以及近几年新出现的方法如电穿孔DNA转移法、精子载体法、胚胎干细胞（embryonal sterm cell,ES细胞）法等。 较常用的三种方法有显微注射法、逆转录病毒感染法和胚胎干细胞法。 1.1 显微注射法 原理：通过显微注射仪直接将重组DNA分子以微注射的方式导入单细胞卵的原核中，再将它植入假孕母体。大约20%的微注射胚胎能够将外源基因整合到染色体基因上组上；大多数的转基因的动物能够将整合的基因传给后代，建立起转基因系。 发展最早、应用最广泛、最有效的制作转基因动物方法 优点：可以把不同大小的重组DNA注入原核，操作简便，易于获得成功，是获得转基因动物最常用、最可靠的方法。 缺点：成本较高、对受精卵损失较大；只能在受精卵的原核期进行基因导入；外源基因通常以多拷贝、串联的形式随机整合于受体基因组中，这种异常排列会妨碍其表达的正常调节。 1.2 逆转录病毒感染法 外源基因被插入到逆转录病毒基因组中，通过病毒感染寄主细胞，外源基因被整合到受体基因组中。 具体方法是在动物早期胚胎的培养液中加入载体病毒，或把胚胎放入培养病毒细胞中共培养；或将载体病毒注入囊胚腔获得转基因动物。 世界上第一个转基因小鼠系就是通过这种方法生产的。 优点：方法简单，不受胚胎发育阶段的影响，而且外源基因多单拷贝整合、效率高，特别适用于转基因家禽生产。 缺点：转基因动物中嵌合体比例大，需给几代选育才能获得纯系，病毒基因也会干扰外源基因的表达。能被导入的基因大小有一定限制（通常为10kb左右）。 嵌合体动物（chimera mosaic animal） 嵌合体一词的英语词是chimera，源于希腊神话，指狮子头、山羊身和蛇尾的雌性怪物。只有部分组织细胞的基因组中整合有外源基因的动物，称为嵌合体动物。 这类动物只有当外源基因整合入的“部分组织细胞”恰为生殖细胞时，才能将其携带的外源基因遗传给子代，一般用胚胎干细胞法或逆转录病毒载体法制备的第一代转基因动物均为嵌合体动物，而显微注射法得到的第一代转基因动物中，也有20％为嵌合体动物。 1.3 胚胎干细胞法 从哺乳动物胚胎中分离出ES细胞进行培养，通过一定方法如脂质体介导、电击或反转录病毒感染等，可将外源基因导入ES细胞，经过筛选，再把阳性ES细胞以微注射的方式注入胚泡期的胚胎中，将这些胚胎移植到假孕母体的子宫中进行发育，得到的子代中就有转基因动物。 ES细胞法多只能建立嵌合体动物，需要经过多代才能获得纯合的转基因动物。因此对于饲养成本高，产仔数量较少的大型哺乳动物来说，不太划算。 2 转基因动物的应用 基因工程育种； 将动物乳腺作为生物反应器，生产对人类有价值的产品，特别是一些药用蛋白（凝血因子VIII、人a抗胰蛋白酶、） 采用人为的方法改变动物的基因组组成，以获得各类疾病模型； 2.1 基因工程育种 提高动物产品的产量和质量及其抗病性： 从理论上来说，通过转移和表达适当的基因，使目的基因在宿主基因组中得以表达，就可以培育出生长快的或节约饲料的或产毛多的或产蛋多的和抗病的动物新品种。用于遗传育种，不仅可以加快改良的进程，使选择的效率提高，改良的机会增多，而且不会受到有性繁殖的限制。 1989年，parsel等对表达外源生长激素转基因猪的生产性能作了系统研究，发现在猪的最快生长时期，如果饲料中的粗蛋白和赖氨酸的含量增加，转基因猪的生长速度比对照快10％一15％、饲料报酬率提高16％一18％，胴体中脂肪降低80％。 但由于转基因猪长期处于较高生长激素的体内环境，内分泌平衡遭到破坏，出现多种