第二章生物大分子2RNA.pptVIP

1.RNA的种类 rRNA: 占80-85% tRNA 非编码RNA（ncRNA） mRNA: 占1-5% rRNA: 3~4种 tRNA：约50种 mRNA：在1000种以上. RNA的三级结构：空间构象 由于RNA没有形成长的规则螺旋的限制，因此可以形成大量的三级结构。 对RNA三维结构的认识主要来自于对tRNA的研究，因为获得分子量较大的RNA的结晶较为困难。 3. 关于RNA的进化 RNA作为原始分子的概念则是1968年Crick和Orgel，1967年Woese分别提出的。 1972年和1993年，Noller等提供了一系列的证据说明核糖体RNA比核糖体蛋白在核糖体的功能中更加重要，为早期的推测提供了实验证据。 1982年和1983年， RNA催化功能的发现为RNA世界合理性的构筑提供了更加坚实的基础。 RNA世界(RNA world)是Gilbert在1986年提出的，其主要兴趣在于催化性的RNA是怎么产生了基因的外显子-内含子结构的。 RNA世界经历了三个阶段： （1）原始的RNA世界 40亿年前，RNA分子具有双重作用，既是信息分子也是生物催化剂，构成了一个自我复制的系统，与其他的核酶一起催化复杂的代谢，并构成了独立的早期生命形式。 （2）当今的RNA： 偶尔独自发挥作用，例如：核酶、核糖开关； 多数情况下，与蛋白质协同起作用，例如：核糖体和剪接体中的RNA组分保留了催化活性，在端粒酶和信号识别颗粒中，起催化作用的则是蛋白质； RNAi机制中，RNA的作用则减少到一个简单的引导序列这一功能。 （3）RNA技术的应用 虽诞生仅半个世纪，但是一个充满活力的领域。 例如：利用适配体（aptamers）检测人体血清中多种蛋白的浓度在临床上有应用价值；miRNA和反义核酸（抑制miRNA）具有制药潜力，成为众多制药公司研发的内容之一。 4 RNA的功能 信使功能： 催化功能： 调控功能： mRNA是遗传信息传递的中介分子。 RNA也可以作为一些病毒的遗传物质，这些病毒的基因组可以自我复制或者通过DNA中介进行复制。 （2）催化功能 1982, Thomas Cech发现Tetrahymena thermophila的26S rRNA的单个内含子在体外具有自我剪接的能力。 1983, Sidney Altman发现Escherichia coli的RNase P 中的RNA组分在体外，能够在没有其蛋白质亚基的条件下进行tRNA前体的加工 。 1989,Cech 和Altman因此获得诺贝尔化学奖。 一些RNA可以直接控制基因表达，调控途径多样，包括不同的RNA折叠，核糖开关，与非编码RNA有关的RNA干扰现象、X染色体随机失活现象等。 ① RNA的不同折叠: 细菌中的色氨酸操纵子是典型例子。 ②核糖开关 （Riboswitches） RNA可以与小分子结合，例如:鸟嘌呤、赖氨酸等，从而改变RNA的结构，是细菌中普遍存在的基因表达的调控方式，该现象在植物中也有发现。 一些mRNAs分子中的特定结构域选择性的结合一些代谢物，作为可以调节的“开-关”元件，在不需要蛋白转录因子的条件下就能够控制基因的表达，称为核糖开关。 因此，RNA在功能上就可以作为不同信号的感受器，感受温度、盐浓度、离子、氨基酸和其他小分子有机代谢物的变化。 核糖开关的典型位置是在mRNAs分子的5’非翻译区（5‘-untranslated regions，5’-UTR）。 在结构上，绝大部分的核糖开关可以粗略分成两个结构域： 适配体（aptamer）: 与靶代谢物选择性结合的RNA序列，长度在100nt以内。 表达平台（“expression platform”）: 在代谢物结合时，通过改变RNA的折叠形式，影响基因表达。 核糖开关的作用机制： 通过对小分子的浓度改变进行应答，来调控基因的表达，这一调控是通过改变RNA的二级结构来完成的。 ③RNA干扰： 不仅涉及mRNA水平的事件，也调节染色质的结构。实际上，在染色体着丝粒区高度异染色质化的维持依赖RNAi的活性。 ④ X染色体随机失活 大分子量的ncRNA常常在合成它们的染色体位点上起作用，通过吸引蛋白对染色质进行修饰，关闭基因表达，这种效应可以扩展到整条染色体，例如：Xist RNA将整条X染色体凝集，产生基因剂量补偿（gene dosage compensation）。 5. RNA的提取 提取原则：一般分子量较