第六章+分子生物学研究法下.pptVIP

* 第六章 分子生物学研究法（下） －基因功能研究技术 基因表达系列分析技术、原位杂交技术、基因芯片技术 － 单个或多个基因，不同条件下表达 基因定点突变、基因敲除、RNAi技术 － 靶基因失效后，生物的表现 酵母单、双杂交技术、四分体技术 － 蛋白质之间的相互作用 6.1 基因表达研究技术 6.1.1 基因表达系列分析技术（SAGE） － 以cDNA序列测定为基础定量分析全基因组表达模式，分析细胞在不同情况下的基因表达信息。 原理：假定任何长度超过9～10个碱基的核苷酸片段能够代表一个特定的转录产物（mRNA）。统计分析这种特异片段的表达频率，就可以知道细胞中不同基因表达情况。 步骤： 分离mRNA，反转录成cDNA； 锚定酶，识别位点为4碱基的限制型内切酶切割； 加连接子1和连接子2 ，连接子均含有ⅡS类标签酶的识别位点。 以ⅡS类标签酶（TE）切割，产生10个碱基左右的特征片段； 两组片段连接，形成双标签片段； PCR扩增，克隆； 分析、筛选、测序。（图） 问题：标签的长度由什么决定？ 用什么方法利用标签进行基因鉴定和表达频率分析？ 6.1.2 RNA的选择性剪接技术 mRNA前体选择性剪接产生剪接异构体方式 平衡剪接 5‘选择性剪接 3’选择性剪接 外显子遗漏性剪接 互斥性剪接