西科大分子生物学考试复习模拟题3.docVIP

假定你正在研究原核生物转座子Tn10，并已设计出一个很好的方法来确定Tn10在 转座期间是否是通过复制还是不干涉DNA复制直接移动。你的想法是根据这两种机制的主要不同点： 如果不复制那么转座子的两条亲链将同时移动；如果复制则有一条亲链移动(如图8．1) 你打算把来自两个不同Tn职的链经退火后都标记上。为了把这些杂种Tn10双螺旋足够地分配到细胞中。你用了含有Tn10的λ噬菌体DNA，它既能在体外操作又能包在病毒壳内成为有侵染力的噬菌体。你决定使用一个因为其他突变而失去活性的噬菌体基因组，因此它就不会复制整合，而且最终可被除去，这样噬菌体基因组可被忽略。你的噬菌体DNA在同样位点插入了稍微不同的Tn10。两种Tn10都含有四环素抗性基因和乳糖代谢基因(lacZ)，但其中一种由于突变使lacZ基因失。这种差异为追踪两种Tn10提供了一个很方便的方法，因为lacZ+ 细菌克隆(与适当的底物共育时)会变蓝，而lacZ-克隆则还是白色。你把两种噬菌体DNA的混合物变性后退火，得到两份相等的杂交双链与纯合双链的混合物(图8．2) 然后你将混合物包装到噬菌体外壳中，侵染lacZ-细菌，并把被侵染细菌涂布在含四环素和可产生有色底物的平板上。一旦噬菌体DNA进入了细菌，转座子将进入细菌基因组(频率很低)，给细菌带来四环素抗性。获得一个Tn10的稀有野生细菌, 可以在选择条件下生存并形成克隆。统计大量