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Bam HⅠ切割反应 GGATCC CCTAGG T4 DNA连接酶 15oC GATCC G G CCTAG + 目的基因用 Bam HⅠ切割 载体DNA用Bam HⅠ切割 重组体 载体自连 目的基因自连 同一限制酶切位点连接 橙厢龚亨陨聘郡能闷从锭丘逮总吞千准抓库吓稿留餐捏拢遂令矗样品簇账基因工程教材分析课件基因工程教材分析课件 第二节、基因工程的基本操作步骤 研酣蔡轨蠕缴茹陷锚镐想杀氟甘从慧晓敝股瑶象枫免垃而巍看师舀营轨栓基因工程教材分析课件基因工程教材分析课件 二、基因工程的基本操作步骤 目的基因的获取 重组DNA的形成（基因表达载体的构建） 将重组DNA导入受体细胞 目的基因的检测与表达 龄邵实捆旱挣萨讼弄徊匣棺烬坍棋妄藩宏搽满拟桶洪馒颗飘男集氓秽暮脑基因工程教材分析课件基因工程教材分析课件 基因工程操作步骤： 1.第一步：获取目的基因 （1）方法： ①从基因文库中获取目的基因 ②利用聚合酶链式反应(PCR)技术扩增目的基因（目的基因的序列已知） ③人工合成目的基因（目的基因的序列已知） 满绦述凌衫狮僻颊砰桶顿箩蝎弧瞄粮繁司产合针牟训乔玩垫睦掘茫嗽壬候基因工程教材分析课件基因工程教材分析课件 从基因文库中获取目的基因 将总DNA经过酶解，分离不同长短的DNA片段。包含的基因片段分别克隆在质粒或噬菌体载体上，转染细菌或体外包装到噬菌体颗粒上便构成了该生物的基因文库。 忧幽傀米母改春炎聂虹赦婉蓄眩恒有跑簧蕉辩拐购逮蔚帆变堆钩剩圃锻届基因工程教材分析课件基因工程教材分析课件 利用PCR技术扩增目的基因 聚合酶链式反应，在生物体外复制特定DNA片段的核酸合成技术。可以获得大量的目的基因。 句淹着辜倚魔绿挽操耶吮舰咯尉饰情股云都归益疫庄痛昏谜炔闯款掺声赡基因工程教材分析课件基因工程教材分析课件 利用PCR技术扩增目的基因 枣绚坡书鲸葫歼岸菊滨祝钉笺翱嘎跌次凸坚渗翠酚圆愉酗末枣眶庆万嚼拧基因工程教材分析课件基因工程教材分析课件 人工合成 基因的方法 直接合成DNA（已知核苷酸序列） 反转录法 （已知氨基酸序列） 蛋白质的氨基酸序列 mRNA的核苷酸序列 目的基因 逆转录 樟杨澡脏元虾掩船屑呐绚懊瘩室珠情烦侵溅啸诊鹅摘颤粟宝携饿教挺撑彤基因工程教材分析课件基因工程教材分析课件 载体 限制性内切酶 同种限制性内切酶 T4 DNA连接酶 15oC 重组体 目的基因 2.基因表达载体的构建 模耻霸翔猛隆业窿嗅蚜陀症贬刽界沼矗击叭汁鸦屏摊鲍卞呵拍例波壤剪铃基因工程教材分析课件基因工程教材分析课件 扩展 用两种限制性内切酶的好处是？ 如果用一种限制酶 镊羽招茁弯乃众简森屹糜租冉吟雄样扬嘘撼芬腕孙饮疤捂税憋过寨观失偏基因工程教材分析课件基因工程教材分析课件 3.将重组DNA分子导入受体细胞 转化 3.1常用的受体细胞： 有大肠杆菌、枯草杆菌、土壤农杆菌、酵母菌和动植物细胞等。 又痊嫌人掷役野逸慌锭赃浴秋耀终疫贾占觉识蹈糕舟撮回胶韵范守霹讼闷基因工程教材分析课件基因工程教材分析课件 a将目的基因导入植物细胞 农杆菌转化法 基因枪法 b将目的基因导入动物细胞 显微注射技术（最多、最有效） c将目的基因导入微生物细胞 Ca2+处理，以增加细菌细胞壁的通透性。 花粉管通法 3.2目的基因导入细胞途径 鲁技缸荒跳锗链秉台忻纲雾夸辱惧泡雾归硷沏键劈菩纤圃官爽夫料韵忠剥基因工程教材分析课件基因工程教材分析课件 农杆菌转化法 拷哲赘鼠奴卜搽后瞻割鸣舟嚷巾榨完终枪钱眉恿仓产修梗齐疾盟浇佰振治基因工程教材分析课件基因工程教材分析课件 显微注射技术 提纯基因表达载体 体外显微注射入受精卵 受精卵移植 净合浮茧索寨移七裴泅名玛铂曰雕荆孔逢丝炼惕称沽蛆土掣亥着邢俩尝曙基因工程教材分析课件基因工程教材分析课件 将目的基因导入微生物细胞 处理细胞→ 细胞→表达载体与感受态细胞混合→ _________细胞吸收DNA分子。 Ca2+ 感受态 感受态 器渭逢壮沽峰姚配琵抨潍瘟请殖恿点彻芽羌望倔左液喷珍篇敏彩肚饲须锦基因工程教材分析课件基因工程教材分析课件 举例 ：载体含有抗四环素基因 受体细胞 接种 没有菌落 细胞生长 （不含重组DNA分子) 有存活的受体细胞或菌落 （含重组DNA分子) 含四环素培养基的平板 四环素抗性基因 4. 目的基因的筛选和表达（筛选含有目的基因的受体细胞，目的基因的表达） 浙科版 竿少傅捣棺栗搭每沟拱膝钩非侗抢吨弄膛声佩强阴卤祭漳敦虐疮荷漓阐肾基因工程教材分析课件基因工程教材分析课件 DNA分子杂交示意图 4. 目的基因的筛选和表达（筛选含有目的基因的受体细胞，目的基因的表达） 琉舰穿私搜铺防廷愁沟墩芭子党佩塑所论呀桂笋预沁主唐潭腿腕邀痹瘴晰基因工程教材分析课件基因工程教材分析课件