00-02DNA重组技术的基本工具.pptVIP

(3)受体生物与受体细胞类型的关系 ①植物：可以是受精卵、体细胞(经组织培养成为完整植株)。 ②动物：受精卵(体细胞的全能性受到限制，不能发育为完整个体)。 4．目的基因的检测与鉴定 类型 步骤 检测内容 方法 结果显示 分 子 检 测 导入 检测 目的基因是否插入受体细胞染色体的DNA上 DNA分子杂交技术(DNA和DNA之间) 是否成功显示出杂交带 表达 检测 目的基因是否转录出mRNA 核酸分子杂交技术(DNA和mRNA之间) 同上 目的基因是否翻译出蛋白质 蛋白质分子杂交(抗原和抗体之间) 同上 重要考点提示 1．基因表达载体的构建是基因工程最核心的步骤，该过程把三种工具(只有两种工具酶)全用上了，在体外进行。 2. 与载体相比较，增加启动子、目的基因和终止子三个基因片段，其功能各不相同。②启动子(DNA片段)≠起始密码子(RNA)；终止子(DNA片段)≠终止密码子(RNA)。 类型 步骤 检测内容 方法 结果显示 个体生物学水平的鉴定 ①确定是否具有抗性及抗性程度 ②基因工程产品与天然产品的活性是否相同 ①抗虫或抗病的接种实验 ②基因工程产品与天然产品活性的比较 是否赋予了预期抗性或蛋白质活性 例3　(2010·浙江卷)在用基因工程技术构建抗除草剂的转基因烟草过程中，下列操作错误的是 (　　) A．用限制性核酸内切酶切割烟草花叶病毒的核酸 B．用DNA连接酶连接经切割的抗除草剂基因和载体 C．将重组DNA分子导入烟草原生质体 D．用含除草剂的培养基筛选转基因烟草细胞 [解析]　构建重组DNA分子时，需用同种限制性核酸内切酶切割目的基因和栽体，再用DNA连接酶连接形成重组DNA分子，而烟草花叶病毒的遗传物质是RNA，所以A项错误。重组DNA分子形成后要导入受体细胞(若是植物细胞，则可导入其原生质体)，若导入的受体细胞是体细胞，经组织培养可获得转基因植物。目的基因为抗除草剂基因，所以未成功导入目的基因的细胞不具有抗除草剂的能力，可用含除草剂的培养基筛选转基因烟草细胞。 [答案]　A 例4　(2010·天津卷)Ⅰ.下图是培育表达人乳铁蛋白的乳腺生物反应器的技术路线。图中tetR表示四环素抗性基因，ampR表示氨苄青霉素抗性基因，BamH Ⅰ、HindⅢ、Sma Ⅰ直线所示为三种限制酶的酶切位点。 据图回答： (1)图中将人乳铁蛋白基因插入载体，需用________限制酶同时酶切载体和人乳铁蛋白基因。筛选含有重组载体的大肠杆菌首先需要在含________的培养基上进行。 (2)能使人乳铁蛋白基因在乳腺细胞中特异性表达的调控序列是________ (填字母代号)。 A．启动子　　　　　　　 B．tetR C．复制原点 D．ampR (3)过程①可采用的操作方法是________(填字母代号)。 A．农杆菌转化 B．大肠杆菌转化 C．显微注射 D．细胞整合 (4)过程②采用的生物技术是________。 (5)对早期胚胎进行切割，经过程②可获得多个新个体。这利用了细胞的________性。 (6)为检测人乳铁蛋白是否成功表达，可采用________(填字母代号)技术。 A．核酸分子杂交 B．基因序列分析 C．抗原—抗体杂交 D．PCR [解析]　(1)基因表达载体的构建过程中，将目的基因导入受体细胞之前，要用同一种限制酶切割目的基因和载体。从图中可以看出，在目的基因和载体中都有HindⅢ和BamH Ⅰ限制酶的切割位点，因此要用HindⅢ和BamH Ⅰ限制酶同时切割载体和人乳铁蛋白基因；载体切割后四环素抗性基因被破坏，因此筛选时要在含氨苄青霉素的培养基上进行。 (2)启动子是一段有特殊序列的DNA片段，位于目的基因的首端，它是RNA聚合酶识别和结合的部位，在启动子存在时才能驱动基因转录出mRNA，最终获得所需要的蛋白质。 (3)将目的基因导入植物细胞常用的方法是农杆菌转化法，将目的基因导入动物细胞常用的方法是显微注射技术。 (4)过程②是将早期胚胎移入受体母牛体内，用到的技术是胚胎移植技术。 (5)胚胎分割是利用机械方法将早期胚胎等分，经移植后获得同卵双胎或多胎的技术，可以看做动物无性繁殖或克隆的方法，利用了细胞的全能性。 (6)检测目的基因是否翻译成蛋白质，需要用相应的抗体进行抗原—抗体杂交，其他三项技术检测的对象都是核酸。 [答案]　(1)HindⅢ和BamH I　氨苄青霉素　(2)A　(3)C　(4)胚胎移植技术　(5)全能　(6)C 考点3　蛋白质工程 1．蛋白质工程的基本原理 2．蛋白质工程与基因工程比较 项目 蛋白质工程 基因工程 区别 过程 预期蛋白质功能→设计预期的蛋白质结构→推测应有的氨基酸