专题1基因工程11DNA重组技术的基本工具使用.pptVIP

3.在基因工程中，切割运载体和含有目的基因的DNA片段，需使用 A.同种限制酶 B. 两种限制酶 C.同种连接酶 D. 两种连接酶 随堂练习 A 4.不属于质粒被选为基因运载体的理由是 A、能复制 B、有多个限制酶切点 C、具有标记基因 D、它是环状DNA D 细胞的基因结构 原核细胞的基因结构 非编码区 非编码区 编码区 编码区上游 编码区下游 启动子 终止子 与RNA聚合酶结合位点 真核细胞的基因结构 非编码区 非编码区 编码区 编码区上游 编码区下游 启动子 终止子 能够编码蛋白质的序列 不能够编码蛋白质的序列 内含子： 外显子： 质粒 DNA分子 限制酶处理 一个切口 两个黏性末端 两个切口 获得目的基因 DNA连接酶 重组DNA分子（重组质粒） 同一种 4.过程: 二、基因表达载体的构建 5.基因表达载体的组成： 复制原点+目的基因+启动子+终止子+标记基因 二、基因表达载体的构建 基因表达载体的组成： 目的基因、启动子、终止子、标记基因 启动子：一段有特殊结构的DNA片段，位于基因的首端， 是RNA聚合酶识别和结合的部位。 终止子：位于基因的尾端，也是一段有特殊结构的DNA 片段，使转录在所需要的地方停止下来。 标记基因：为了鉴别受体细胞中是否含有目的基因， 从而将含有目的基因的细胞筛选出来。 二、基因表达载体的构建 小结： 一、获取目的基因的常用方法 ①从基因文库中获取 （鸟枪法构建基因组文库，逆转录法构建部分基因文库，目的基因在细胞内复制） ②利用PCR技术扩增目的基因 （目的基因在细胞 外复制） ③通过DNA合成仪用化学方法直接人工合成 质粒 DNA分子 限制酶处理 一个切口 两个黏性末端 两个切口 获得目的基因 DNA连接酶 重组DNA分子（重组质粒） 同一种 过程: 二、基因表达载体的构建 基因表达载体的组成： 复制原点+目的基因+启动子+终止子+标记基因 二、基因表达载体的构建 基因工程的基本操作程序第二课时 转化 —— 方法 将目的基因导入 植物细胞 将目的基因导入 动物细胞 将目的基因导入 微生物细胞 农杆菌转化法 基因枪法 花粉管通道法 ——显微注射法 ——感受态细胞 目的基因进入_________内，并且在 受体细胞内维持_____和_____的过程 受体细胞 稳定 表达 三、将目的基因导入受体细胞 1、将目的基因导入植物细胞的方法： 农杆菌转化法 （1）农杆菌介绍 （2）原理及适用范围 三、将目的基因导入受体细胞 2、将目的基因导入动物细胞 三、将目的基因导入受体细胞 显微注射法：转基因动物中采用最多，最为有 效的方法 操作程序： 表达载体提纯 从雌性动物体内取出卵 显微注射 胚胎早期培养 胚胎移植 显微注射仪 固定吸管 微量注射针 针尖极细（0.1至0.5μm） 3、将目的基因导入微生物细胞 （1）常用大肠杆菌： （2）大肠杆菌的转化方法 首先用Ca2+处理细胞，使细胞处于一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态，这种细胞称为感受态细胞。第二步是将重组表达载体DNA分子溶于缓冲液中与感受态细胞混合，在一定的温度下促进感受态细胞吸收DNA分子，完成转化过程。 检测 鉴定： ①检测转基因生物染色体的DNA 上是否插入了目的基因 ②检测目的基因是否转录出了mRNA ③检测目的基因是否翻译成蛋白质 抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等 方法—— 方法—— 方法—— DNA分子杂交 分子杂交 抗原抗体杂交 四、目的基因的检测与鉴定 DNA-DNA 杂交双链分子 变性 复性 不同来源的DNA分子 ①检测转基因生物染色体的DNA 上是否插入了目的基因 方法—— DNA分子杂交 复性 RNA DNA ②检测目的基因是否转录出了mRNA 方法—— ③检测目的基因是否翻译成蛋白质 方法—— 抗原抗体杂交 鉴定： 抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等 1.2 基因工程的基本操作程序 基因工程程序总结 一、获取目的基因的常用方法 ①从基因文库中获取 （鸟枪法构建基因组文库，逆转录法构建部分基因文库，目的基因在细胞内复制） ②利用PCR技术扩增目的基因 （目的基因在细胞 外复制） ③通过DNA合成仪用化学方法直接人工合成 基因表达载体的组成： 复制原点+目的基因+启动子+终止子+标记基因 二、基因表达载体的构建 转化 —— 方法 将目的基因导入 植物细胞 将目的基因导入 动物细胞 将目的基因导入 微生物细胞 农杆菌转化法 基因枪法 花粉管通道法 ——显微注射法 ——感受态细胞 目的基因进入_________内，并且在