生物化学第20章转录与加工.pptVIP

动物、植物、昆虫等不同来源的细胞，RNApolⅡ的活性都可被低浓度的α-鹅膏蕈碱抑制，而RNApolⅠ不受抑制。 动物RNApolⅢ受高浓度的α-鹅膏蕈碱抑制，而酵母、昆虫的RNApolⅢ不受抑制。 除了细胞核RNA聚合酶外，还分离到线粒体和叶绿体RNA聚合酶，它们的结构简单，能转录所有种类的RNA，类似于细菌RNA聚合酶。 第二节 真核生物的转录 ? 一 真核生物RNA聚合酶 三种细胞核内的RNA聚合酶： RNA聚合酶I转录45S rRNA前体， RNA聚合酶II转录mRNA前体及大多数snRNA， RNA聚合酶III转录tRNA、5s rRNA、snRNA和scRNA等小分子RNA。 这三种RNA聚合酶分子量都在50万左右，亚基数分别为8-14。 ? 真核生物RNA聚合酶中没有细菌σ因子的对应物，聚合酶自身也不能识别和结合到启动子上，而需要由其它转录因子和聚合酶配合，在启动子上装配成转录起始复合物。 酶 位置 产物 活性比较（%） 对α-鹅膏蕈碱 的敏感性 RNA聚合酶Ⅰ 核仁 rRNA 50-70 不敏感 RNA聚合酶Ⅱ 核浆 hnRNA 20-40 敏感 RNA聚合酶Ⅲ 核浆 snRNA 10 有种属特异性 真核生物RNA聚合酶的种类、性质及功能 转录因子：Transcripton factors(TF)，RNA聚合酶在起始转录时，常需要一些辅助因子（蛋白质）参与作用，此类蛋白质统称为转录因子 真核生物转录因子种类多。真核生物RNA的转录与原核生物相比要复杂的多。 鸡卵清蛋白基因及其mRNA 真核和原核生物转录的抑制 1 模板的抑制剂 放线菌素D是一种含多肽的衍生物，它能与双螺旋的DNA紧密结合，使DNA不能作为RNA合成的有效模板。放线菌素D的作用机制是在于它的吩噁嗪酮环能插入到双股DNA的G.C碱基对之间，把两条DNA链紧紧地“固定”在一起。低浓度的放线菌素D即可抑制转录。但对DNA复制的抑制需要较高的浓度。此外，一些抗菌素和染料也能与DNA结合。例如吖啶类染料以及溴化乙锭等。 ? 2 RNA聚合酶抑制剂 利福平能与RNA聚合酶的β亚基结合，从而抑制转录的起始，即抑制RNA的第一个磷酸二酯键的形成。但利福平不影响RNA链的延长。链霉菌素能抑制RNA链的延长反应。 α－鹅膏蕈碱（α－amanitin）是从一种毒蘑菇分离出的剧毒物质。它主要能抑制真核生物RNA聚合酶Ⅱ的活性，从而抑制mRNA的合成。高浓度的这种物质才能抑制RNAⅢ的活性。但它不能抑制RNA聚合酶Ⅰ的活性，也不能抑制细菌、线粒体、叶绿体RNA聚合酶的活性。 图18-8c 第三节 转 录 后 的 加 工 由RNA聚合酶催化合成的RNA分子往往不是最终产物，需要经过切除或酶促修饰才能转变成细胞所需要的分子。 一. mRNA的加工。 原核生物的mRNA一般是不需要加工即可用作蛋白质合成的模板。通常原核生物mRNA边转录边翻译。 真核生物通过转录合成的mRNA前体需要比较复杂的加工才能转变成有功能的、成熟的mRNA。 1 大多数真核生物的基因是由外显子（exon）和内含子（intron）构成的一种镶嵌基因（或分裂基因）。 2 外显子是编码区，内含子是非编码区。编码区只占全顺序的少部分。因此mRNA转录后的加工的一个重要的内容就是内含子的切除。这种切除和外显子的拼接应该是高度准确的。 内含子的剪接 3 内含子的切除和外显子的连接是在一个剪接体中完成的。剪接体（spliceosome）是一个复杂的聚合体，包括核内小分子RNA（snRNAs）和一些蛋白质，它们一起构成核内小分子核糖核蛋白体（snRNP）。然后这些snRNP与mRNA前体结合形成一种剪接体。 ?snRNP snRNA的大小 作用 U1 165nt 与5’端剪接部位结合 U2 185nt 与分支部位结合 U5 116nt 与3’端剪接部位结合 U4-U6 145nt（U4） 参与剪接体的装配 ? 106nt（U6） ? 鸡卵清蛋白基因的内含子和外显子 内含子剪接 甲状腺 脑 降（血）钙素 3‘-端加尾 5‘-加帽子 * * 第二十章 转录与加工