第二章：遗传的物质基础-dna.pptVIP

磷酸酯键（phosphodiester bond） 带负电荷的磷酸基团的静电斥力 溶液中的正离子能有效地屏蔽了磷酸基之间的静电斥力，稳定DNA的结构。 碱基堆积力（Base stacking forces） 是主要的稳定因素。 DNA螺旋体是内部由重叠排列的碱基对堆积的一个棒状实体。因为各个碱基堆积在一起，产生碱基间的疏水作用力和范德华引力，统称为碱基堆积力，也称非特异性结合力。 DNA的变性、复性、杂交 dsDNA ssDNA ( 加温, 极端pH, 尿素, 酰胺 ) 4.1 DNA的变性（denaturation），也称为熔解（melting）： 双螺旋区氢键断裂，空间结构破坏，两条核苷酸链便逐渐彼此分离，形成无规则的线团，只涉及次级键的破坏。 常用的DNA变性方法：热变性和用变性剂处理 变性剂如：甲酰胺、尿素、甲醛及强碱等破坏氢键。 当DNA分子加热变性后，其260nm的紫外吸收会急剧增加的现象叫做增色效应； 220 240 260 280 0.1 0.2 0.3 0.4 1 2 3 波长/nm 双链DNA 变性DNA 核苷酸 光吸收法是测定DNA和RNA浓度和纯度的一种方法： 浓度： 在波长260nm紫外线下 1OD260 的DNA=50 μg/mL 1OD260 的RNA=40 μg/mL 纯度： DNA：A260/A280=1.8，若比值＞1.8，说明制剂中RNA尚未除尽。 若比值＜1.8，说明溶液中有酚和蛋白质的污染。 RNA：A260/A280=2.0，若比值＞ 2.2，说明RNA已经水解成单核苷酸 Tm （melting temperature）：DNA的变性温度、融点或融解温度，是指消光值上升到最大消光值一半时的温度。 50%DNA分子发生变性，即熔解曲线中点对应的温度。 影响DNA分子热变性Tm值的主要因素 DNA分子的碱基组成 DNA分子的碱基排列 在（G+C）含量相同的DNA分子间，A / T碱基对集中分布，可形成变性的跳跃核心，其变性速度较快，Tm值较小。 TATA box DNA片段的大小 大片段DNA分子间比较，片段长短对Tm值的影响较小，短于100个碱基对的DNA分子间比较，片段较短的Tm较小。 变性剂的影响 在含有尿素，酰胺等变性剂的溶液中，变性剂会与DNA分子中的碱基形成新的氢键，改变原有的A/T，G/C的配对关系，从而导致Tm值的降低，甚至可降至40℃。 盐浓度 变性溶液中的钠盐浓度越高，对核苷酸上磷酸基团静电荷的屏蔽作用就愈大，双螺旋DNA分子的稳定性就愈高，Tm值也就愈大。 Na+ 0.01 mol/L 0.1 mol/L 1.0 mol/L A260 Tm pH 当DNA溶液的pH在5~9范围内，热变性测定的Tm值变化不大。 但当pH小于5时，DNA分子易发生脱嘌呤，特别是当pH为2~3时，碱基会发生广泛质子化，从而使DNA分子中的氢键减弱，引起Tm值降低。 但磷酸二酯键仍保存完整 4.2 DNA分子的复性（renaturation），也称重退火（reannealing）： 已发生变性的DNA溶液在逐渐降温的条件下，两条核苷酸链的配对碱基间又重新形成氢键，恢复到天然DNA的双螺旋结构。 4.3 分子杂交 已经复性的DNA分子如果两条链来源不同，就叫杂交分子。 核酸的杂交（hybridization ）：序列互补的单链RNA和DNA，或DNA和DNA，或RNA和RNA，根据碱基互补的原则，借助氢键相连而形成双链杂交分子的过程。 * 第二章 遗传的物质基础---DNA 一、DNA的一级结构 二、DNA的二级结构 三、DNA的三级结构 DNA是遗传的物质基础。 基因是具有特定生物功能的DNA序列，通过基因的表达能够使上一代的性状准确地在下一代表现出来。 DNA的作用与它的分子结构密切相关。 DNA分子携带两类不同的遗传信息： 负责编码蛋白质氨基酸组成的信息 ---三联体密码 负责基因选择性表达的信息 ---非编码DNA序列（顺式调控信息） 一、DNA的一级结构 DNA的一级结构是由脱氧核糖核苷酸通过3’→5’磷酸二酯键连接而成的高聚物。 基本单位：脱氧核苷酸 磷酸和脱氧核糖不变，含氮碱基可变。 4种含氮碱基 4种脱氧核苷酸 Names of DNA Base Derivatives 2-Deoxythymidine-5-monophosphate 2-Deoxythymidine Thymine 2-Deoxyguanosine-5-monophosphate 2-Deoxy