血流感染实验室诊断新进展北京协和医院检验科.ppt

北京协和医院检验科 王瑶 2013年4月13日 在多次血培养中单次培养下列细菌阳性 凝固酶阴性葡萄球菌 棒状杆菌 微球菌 丙酸杆菌 芽孢杆菌 如多次培养阳性，可能为条件致病菌，需结合临床分析 血培养阳性时间－金黄色葡萄球菌 如何分析血培养凝固酶阴性葡萄球菌？ University Hospital of Base，2003－2007 3060阳性血培养，654CNS，粒缺患者除外 232 (35%)真正BSI，422 (65%)污染 BSI由感染科医生判断，至少一份血培养CNS阳性，有感染临床表现 SIRS: 体温>38C or <36C; 心率>90/min; 呼吸 >20/min; 白细胞>12 or <4 G/L or >10% 未成熟中性粒细胞 32%患者有1瓶以上CNS阳性，BSI68 %，污染12% (p <0.001) 没有SIRS症状：BSI 5%，污染29% (p <0.001) Clin Microbiol Infect. 2012 online 单瓶血培养CNS的BSI和污染患者区别 Clin Microbiol Infect. 2012 online 单瓶血培养CNS阳性BSI与临床症状相关性 Clin Microbiol Infect. 2012 online Clin Microbiol Infect. 2012 online 降低血培养污染率－－严格消毒 血培养瓶消毒：70%酒精消毒血培养瓶橡皮塞,待干60秒。或70%异丙醇消毒干燥 皮肤消毒： 三步法 70%酒精擦拭静脉穿刺点 >30秒 1%?2%碘酊30秒或10%碘伏消毒60秒：从穿刺点向外画圈消毒,直径>3cm 70%酒精脱碘 一步法 葡萄糖酸洗必泰作用30 s，或70%异丙醇消毒后自然干燥，但不适用于2个月以内的新生儿。 急诊血培养污染率与工作量相关 The University of Michigan Health System急诊 血培养大多数由采血员采集，其次为护士和医生 采血员:病人= 1:9，重症区护士:病人= 2:3，其它区域护士:病人=1:4 年病人量82521人，采集血培养者7586人 11.4%至少1瓶阳性，病原菌阳性率8.0%，污染率3.7% 多套培养患者阳性率7.4%，单套培养阳性率5.1%（p<0.001），污染率无显著差别（2.2% vs. 2.6%） Schuyler Halverson, et al. JCM. 2013 online 急诊小时工作量 Schuyler Halverson, et al. JCM. 2013 online 繁忙时血培养污染率增加 OR=1.23 OR=0.93 Schuyler Halverson, et al. JCM. 2013 online 抗菌药物治疗与血流感染死亡率 死亡率 Chest 115 (2): 1999 血培养三级报告制度 血培养 阳性 终报告 革兰染色 传种培养 初步报告 (直接药敏) 鉴定菌株 电话报告 鉴定＋标准药敏 血培养结果回报对治疗的影响 A = Appropriate Therapy(正确治疗) I = Inappropriate Therapy(不正确治疗) Clin Infec Dis 24:584-602, 1997 血流感染快速分子诊断 分子诊断不受抗菌药物使用的影响 血培养阳性后分子诊断 直接使用血标本进行分子诊断 快速 但不能提供药敏结果 血培养阳性瓶分子鉴定 Antigone Kotsaki, et al. Expert Opin. Med. Diagn. 2012, 6(3):209 阳性血培养－基于PCR的检测 PCR特异性检测 病原特异性PCR 特定耐药基因检测：葡萄球菌mecA, 肠球菌van 细菌载量：肺炎链球菌自溶毒A基因lytA拷贝数 广谱检测：PCR扩增特定靶位 多态性分析 测序 后续基因检测 种特异性real-time PCR Expert Opin. Med. Diagn. 2012, 6(3):209. Curr Opin Infect Dis.?2011, 24(2):137 qPCR鉴定血培养阳性瓶中铜绿假单胞菌 Target：ecfX gene 血培养系统：BacT/ALERT，87瓶FA、13瓶FN，涂片均显示G-b 对照方法：氧化酶，API 20E DNA提取：0.5ml肉汤，离心后加裂解液，水煮法 定量PCR： 扩增：Oligonucleotide primers 基因特异性检测：fluorescent-labeled hybridization probes，152bp fragment Annal Clin Microbiol Antimicrob 2010, 9:2