表面活性剂对产碱性蛋白酶菌株发酵的影响.pdfVIP

试验研究 现代园艺 2017 年第4 期 表面活性剂对产碱性蛋白酶菌株发酵的影响 石培欣，马金龙* ，黄广森 （大连民族大学生命科学学院，辽宁大连 116600 ） ：从大连海域海泥样品中筛选获得的产碱性蛋白酶的海洋细菌入手，选用司班、吐温-80、硬脂酸、羟甲基纤维素钠 4 种表 面活性剂，采用摇瓶发酵，福林酚显色 测粗酶活性，初步确定其中司班-80 为最适表面活性剂，司班用量为0.625%时，酶活性为 169.8U/mL。设计正交实验，优化发酵条件，用L9（33）正交表，利用SPSS13.0 软件处理数据得到最优工艺———培养温度33℃，培养 基pH8.0，培养时间48h。可用于后续发酵产酶研究。 ：碱性蛋白酶；表面活性剂；筛选 碱性蛋白酶（ ）是指pH 值偏碱性 1.2 仪器 范围内水解蛋白质肽键的酶类，1913 年Rohm 首先将 光光度计，美国赛默飞BioMate 3S 光光度计。 胰蛋白酶作为洗涤浸泡剂使用，1945 年瑞士 Dr.Jaag 2 方法与步骤 等人在 衣芽孢杆菌（ 中发现 2.1 表面活性剂种类挑选 了碱性蛋白酶。有数据显示，全世界工业用酶每年销售 选取 4 种表面活性剂（ 别为司班，吐温-80 ，硬 额大约为1 亿美元，在所有的工业用酶制剂中75%是 脂酸，羟甲基纤维素钠）和青霉素进行实验。选取酶活 蛋白水解酶，而蛋白酶是工业用酶中占据比例最大的 性最高一组的表面活性剂种类进行后续实验。 酶类，大约占全世界每年总销售量的60%左右。碱性 表1 蛋白酶在食品、洗涤及制革等行业中有着广 的用途。 水平 A 培养温度/ ℃ B 培养基 C 培养时间/h 因此，碱性蛋白酶研究成为蛋白酶研究的热点。 1 26 7.5 24 本文是基于大连海域得到的高产碱性蛋白酶的菌 2 33 8.0 36 株，采取非基因变异方法，通过添加表面活性剂改变细 3 40 8.5 48 胞膜（壁）通透性，提高细菌产酶能力，初步探求所筛选 2.2 酶活力测定方 海洋菌的工业应用价值，有重要的理论和实际意义。 福林酚法。 1 材料与仪器 2.3 表面活性剂使用条件优化 1.1 材料 使用2.1 所选表面活性剂，采用三因素三水平正 1.1.1 菌种：大连海域产碱性蛋白酶芽孢杆菌， 选自 交实验设计。 大连海域采集的海泥样品中筛选能产碱性蛋白酶的海 依照正交表，使用液体发酵培养基进行实验。每组 洋细菌DL12 ，由本实验室保存。 实验发酵液10000r/min、4℃离心10min 得上清液即为 1.1.2 培养基及其配方：牛肉膏蛋白胨培养基：牛肉膏 粗酶液，用福林酚法测定其酶活力。记录每组酶活数 3.0g/L、蛋白胨 10.0g/L、NaCl 5.0g/L、琼脂 15.0g/L ，pH 据，处理数据，使用SPSS13.0 软件进行数据 析。 值7.4~7.6。 3 结果 1.1.3 液体发酵培养基：酪蛋白酸水解物 （或干酪素） 3.1 表面活性剂种类确定 10.0g/L、葡萄糖 15.0g/L、KH PO 1.0g/L、MgSO ·7H O 酪氨酸标准溶液浓度与其 680nm 处吸光度值关 2