DNA测序试剂盒中文操作手册-1.pdf

DNA 测序试剂盒中文操作手册 BigDye Terminator v3.1 和v1.1 BigDye Terminator 试剂盒简称BDT 。BDT v3.1 是DNA 测序的标准试剂盒，而BDT v1.1 则是专门为PCR 产物测序而优化设计的。BDT v3.1 适用于所有类型DNA 模板的测序，对于长片段测序更具优势。 dGTP-BigDye Terminator 试剂盒简称BDG 。BDT 是DNA 测序的标准试剂盒，而BDG 则是专门为困难模 板测序而优化设计的。长的重复序列、二级结构、富含 GC 的片段等通常会干扰测序 PCR 反应，导致测序失 败的DNA 模板称为困难模板。只有BDT v1.0、v2.0 和v3.0 有相应的BDG 试剂盒，BDT v1.1 和v3.1 本身已有 足够能力对付困难模板，所以没有相应的BDG 试剂盒。 BDT v1.0、v1.1、v2.0 以及BDG v 1.0、v2.0 可以使用同样的 matrix 或者光谱校正；BDT v3.0、v3.1 以及 BDG v3.0 可以使用同样的matrix 或者光谱校正。Matrix 与光谱校正是同义词。在不同型号的仪器上，测序的 Dye Set 选择如下： BDT v3.1 BDT v1.1 310/377 E E 3100/3100-Avant Z E 3700 v2.0 H E 3700 v1.1 和v1.1.1 D E 注 意 ：少数早期的 3100 和 3100-Avant 软件中没有 MtxStd {Sequencing-SetZ}.par 文件，这时可以用 MtxStd {Sequencing-SetE}.par 代替，用于做BDT3.1 的光谱校正。 以下操作适用于 BDT v1.1 和 BDT v3.1 试剂盒，而且对于这两种试剂盒的操作完全一样，但是不适用于 BDT v1.0、v2.0 和v3.0 以及 BDG v1.0、v2.0 和v3.0 试剂盒。 1. 测序 DNA 模板的纯度与用量 DNA纯度：OD260 / OD280 = 1.6 ~ 2.0。DNA用量： PCR产物 100-200 bp 1-3 ng 200-500 bp 3-10 ng 500-1000 bp 5-20 ng 1000-2000 bp 10-40 ng 2000 bp 20-50 ng 单链DNA 25-50 ng 质粒，双链DNA 150-300 ng Cosmid, BAC 0.5-1 µg 细菌基因组DNA 2-3 µg 1 推荐使用酒精/NaAc法或者Centricon-100纯化柱(PN: N930-2119)在测序前对PCR产物进行纯化，然后 再进行DNA测序的PCR反应。如果使用纯化柱，按生产厂家建议的步骤进行操作，但是将离心速度由1000 x g 提高到3000 x g 。