分子生物学课件11dnastructureandchemistry.ppt

a). Evidence that DNA is the genetic information i). DNA transformation ii). Transgenic experiments iii). Mutation alters phenotype b). Structure of DNA chemistry Structure (polynucleotide strand) Structure of the DNA double helix supercoiled DNA的一级结构 DNA碱基排列顺序（生物学定义） 由A、T、G、C四种脱氧核苷酸组成，通过3’-5’-磷酸二酯键连接成的线形结构。（化学定义） 方向：5’ →3’ 阅读方式（书写方式）： 5’ →3’ 一级结构决定DNA的高级结构，决定DNA的功能。 DNA由脱氧核糖核酸组成，2’-H，对碱具有耐受性，PH在11.5条件下，一级结构仍不被破坏； RNA由于2’-OH，对碱不具有耐受性，易被碱水解。 DNA一级结构据功能分两类： 功能较明确的序列 编码序列：与代谢有关的序列 调控蛋白（阻遏蛋白） 调控序列 （基因表达水平由调控蛋白和调控序列决定） 功能不明确的序列 DNA一级结构的分析 1. DNA的分离，提取 ?材料的选择 物种、组织的选择 ? 组织匀浆 细胞分散、破碎 ? 破碎细胞 SDS表面活性剂 ? 除蛋白 蛋白酶K 酚、氯仿抽提 ? 除RNA RNA酶 LiCl 沉淀 ? DNA回收 乙醇、异丙醇沉淀 纯度鉴定： ? 电泳 常用琼脂糖凝胶电泳，也用聚丙烯酰胺凝胶电 泳，用溴化乙锭（EB）染色，紫外灯下检测。 检测量可达ug，ng级 检测信息：DNA的有无 DNA的大小， 构象 纯度 ? 紫外吸收法（260nm） OD260 ---- 决定DNA的量 OD280 ---- 决定Protein的量 OD260/280 =1.8 纯样品 1.8 不纯 =2.0 RNA（纯） 2.限制性内切酶图谱 ? 限制性内切酶的概念 ? 限制性内切酶的发现 ? 限制性内切酶图谱 ? 特性：①识别序列有对称性（回文结构） 5’-GGTACC-3’ 3’-CCATGG-5’ ②识别序列一般为4 - 8个核苷酸； ③切口：粘性末端和平口末端 ④应用于DNA重组、DNA结构分析（突变、缺失） 遗传图谱分析； 粘性末端 平口末端 ↓ ↓ 5’-ATCGAT-3’ 5’-ATCGAT- 3’ 5’-ATC GAT- 3’