丹参晚期胚胎富集蛋白基因SmLEA的表达特征研究.PDFVIP

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１０，３０（１）：５１５５ 丹参晚期胚胎富集蛋白基因ＳｍＬＥＡ的表达特征研究 刘丛玲　王?之 （陕西师范大学生命科学学院药用植物资源与天然药物化学教育部重点实验室 西北濒危药材资源开发国家工程实验室　西安　７１００６２） 摘要　利用ＤＮＡｗａｌｋｉｎｇ的方法克隆到了丹参ＳｍＬＥＡ基因５′端上游调控序列，约１０３８ｂｐ。经生 物信息学预测分析，该区域含有多种与逆境胁迫、ＡＢＡ、种子特异表达相关的顺式作用元件。实时 荧光定量 ＰＣＲ检测结果表明，１００ ｍｏｌ／ＬＡＢＡ，２００ｍｍｏｌ／ＬＮａＣｌ，低温（４℃）及脱水处理后， μ ＳｍＬＥＡ基因的表达均得到了明显的提高，与启动子序列分析的结果相符合。表明ＳｍＬＥＡ基因可 对盐、脱水和低温胁迫以及 ＡＢＡ做出响应。 关键词　丹参　ＳｍＬＥＡ基因　启动子　表达特征 中图分类号　Ｑ９４ 　　干旱、盐渍等逆境胁迫是限制农作物生长和生产 因的表达特征，为ＳｍＬＥＡ基因的功能研究奠定基础。 ［１］ 的重要环境因素 。寻找高效的抗旱、抗盐基因资源 １　材料与方法 并利用分子生物学技术获得高效耐旱、耐盐新品种已 成为解决该问题的一个新技术。在逆境生理学中，晚 １．１　材　料 期胚胎富集蛋白（ｌａｔｅｅｍｂｒｙｏｇｅｎｅｓｉｓａｂｕｎｄａｎｔｐｒｏｔｅｉｎ， 　　丹参种子种于含蛭石的营养钵中，于人工气候箱 ＬＥＡ）的研究受到了极大的重视。晚期胚胎富集蛋白首 （宁波江南仪器厂，型号为 ＲＸＺ５００Ｄ）中培养［温度 ［２］ ［３４］ ［５６］ 先发现于棉花的种子中 ，继而在植物 、细菌 、 ２ （２５±２）℃，湿度４８％，光照强度２１６ｍｏｌ·ｍ／ｓ，光照 μ ［７］ ［８］ ［９１１］ 酵母 、绿藻 、线虫 中发现，大多数受到外源脱落 时间１６ｈ／ｄ］，待长出６片真叶时备用。丹参实生苗分 酸、干旱、高盐、低温的诱导表达。转基因植物和酵母 别用 １００ｍｏｌ／ＬＡＢＡ，２００ｍｍｏｌ／ＬＮａＣｌ浇灌、放置于 μ 研究表明，过量表达ＬＥＡ基因可以提高植物或酵母的 ４℃，其它培养条件保持不变，分别在０ｈ，１ｈ，２ｈ，４ｈ，６ｈ， 耐旱、耐盐、耐冷性［３，１２１３］。 １２ｈ，２４ｈ后取样。将丹参实生苗取出，放置于滤纸上， 　　启动子是ＲＮＡ聚合酶能够识别并与之结合，从而 分别在 ０ｍｉｎ、１０ｍｉｎ、３０ｍｉｎ、６０ｍｉｎ、８０ｍｉｎ、１００ｍｉｎ、 起始基因转录的一段 ＤＮＡ序列，通常位于基因上 ［１４］ １２０ｍｉｎ后取样，所有样品经液氮速冻后放置于－８０℃ 游 。转录因子必须与启动子上所含有的顺式作用元 冰箱。 件进行特异性的结合后才可以调控基因表达的强度或 ［１５］ １．２　菌　株 特异性 。因此，研究基因的启动子对于揭示该基因