杨树蔗糖转运体基因PagSUT4的鉴定及功能分析.pdfVIP

第52卷 第 8期 林 业 科 学 Vo1．52．No．8 2016年 8月 SCIENTIA SILVAE SINICAE Aug．，2016 doi：10．11707／j．1001—7488 杨树蔗糖转运体基因PagSUT4的鉴定及功能分析术 张 利 徐 向东 王丽娟 卢孟柱 (国家林业局林木培育重点实验室 中国林业科学研究院林业研究所 北京 100091) 摘 要： 【目的】植物蔗糖转运体 SUTs参与蔗糖由源组织到韧皮部的装载、韧皮部的运输和由韧皮部到库组织的 卸载过程 ，对植物生长发育至关重要 。本研究通过在杨树 中超表达 PagSUT4基 因 (GenBank登录号：KX545405)并 分析转基因株系的表型，探讨PagSUT4在杨树糖转运、光合作用和次生生长中的作用。 【方法】利用同源基因克隆 技术 ，克隆银腺杨 PagSUT4基因；利用实时荧光定量 PCR技术 ，分析银腺杨 PagSUT4基 因在根、幼叶、成熟叶、初 生茎、次生茎 、雄花和雌花及木质部、韧皮部 中的表达 。通过在烟草叶片瞬时转化 5 YFP—PagSUT4，对 PagSUT4 的亚细胞定位 进行 分析 。利用 Gateway技术 ，将 PagSUT4编码 区序列重 组进 入 PMDC32载体 ，从 而构 建 s-PagSUT4载体 。利用农杆菌介导法转化银腺杨 ，并选取 PagSUT4表达量较高的2个转基 因株系用于表型分 析。对在温室生长2个月的转基因株系和对照植株的株高、地径、净光合速率、胞 间CO，浓度 、气孔导度和蒸腾速 率进行测定。此外 ，通过组织切片对转基因和对照植株的第 7节间的解剖学特征进行分析。 【结果 】PagSUT4基因 编码的蔗糖转运蛋白定位于液泡膜 。PagSUT4基 因在各组织中均有表达 ，并在成熟叶、次生茎、韧皮部和花 中具有 较高表达。基于实时荧光定量 PCR分析 ，确认获得 13个 PagSUT4超表达株系，其 PagSUT4在叶片中的表达量均 显著高于对照。2个 PagSUT4超表达株系 (s1和 S12)的气孔导度 、蒸腾速率和水分利用效率均高于对照，而其胞 间CO 浓度低于对照；净光合速率显著高于对照，分别高出24％和21％；与对照相 比，株高分别增加22％和 17％， 地径分别增加 9％和7％。茎解剖分析发现 ，2个 PagSUT4超表达株系第 7节间木质部宽度与对照株系相 比分别增 加 32％和 2l％。 【结论】PagSUT4基因主要在成熟叶、次生茎和韧皮部及花中发挥作用。杨树超表达 PagSUT4可能 通过促进 叶片中糖 的外运和茎中糖 的运输与卸载 ，提高蔗糖在源端 的装载及在库端的卸载效率进而对光合作用产生 正反馈效应 。光合作用的增强和茎 中蔗糖卸载效率的增加 ，促进杨树的高生长和径 向生长(次生木质部发育)。 关键词 ： 杨树 ；超表达 ；PagSUT4；糖运输 ；光合作用 ；木质部发育 中图分类号 ：s718．46 文献标识码 ：A 文章编号 ：1001—7488(2016)08—0021一O8 Identification andFunctionalAnalysisofthePopulus SucroseTransporterGenePagSUT4 ZhangLi XuXiangdong WangLijuan LuMengzhu (KeyLaboratoryofTreeBreedingandCultivationofStateForestryAdministration ResearchInstituteofForestry，CAF Beijing100091) Abstract： 【Objective】Inhigherplants，sugarsfunctionasthemainenergyre