项目一-酵母细胞的固定化制备及应用.pptx

项目一 酵母细胞的固定化制备及应用;基本知识;直接使用酶、固定化酶和固定化细胞催化的优缺点;酶和细胞固定方法的选择;固定化酶的应用实例;一、实训目的;实训原理;将固定化酵母接种于发酵培养基中，静置条件下进行酒精发酵，48小时后过滤后的发酵液进行蒸馏，收集馏出液并测定乙醇含量。 固定化酶和固定化细胞的原理是将酶或微生物细胞利用物理、化学方法，将酶或细胞与固体的水不溶性支持物（或称载体）相结合，使其既不溶于水，又能保持酶和微生物的活性。它们在固相状态下既可作用于底物，又具有与离子交换树脂相似的特点，而且还具有一定的机械强度，便于操作。;实验材料与仪器;实训步骤;海藻酸钠溶液与酵母细胞混合 将溶化好的海藻酸钠溶液冷却至室温，加入已活化的酵母细胞，进行充分搅拌，使其混合均匀，再转移至注射器中。 固定化酵母细胞 以恒定的速度缓慢地将注射器中的溶液滴加到配制好的CaCl2溶液中，观察液滴在CaCl2溶液中形成凝胶珠的情形。常温下静置2h，使其充分固化后滤出凝胶颗粒，用无菌水洗涤2~3遍，得到固定化细胞。;固定化酵母的增殖 将固定化颗粒投入增殖培养基中进行增殖，120r/min/30℃下增殖24h。定时测定酵母细胞。 固定化酵母的批次酒精发酵 将增殖后的固定化酵母颗粒，至于150mL发酵培养基中、28℃进行发酵。定时记录发酵液的糖度及酒精度的变化。;酒精发酵液的蒸馏及酒精度的测定;注意事项;溶化好的海藻酸钠溶液必须冷却至室温，否则会因温度过高杀死酵母菌 搅拌要彻底充分，是两者混合均匀，以免影响实验结果的观察 可利用海藻酸钠制成不含酵母菌的凝胶珠，用作对照 海藻酸钠胶体在CaCl2这种电解质的作用下，发生聚沉，形成凝胶珠，需稳定30min左右 ;观察凝胶珠的颜色和形状 如果制作的凝胶珠颜色过浅、呈白色，说明海藻酸钠的浓度偏低，固定的酵母细胞数目较少；如果形成的凝胶珠不是圆形或椭圆形，则说明海藻酸钠的浓度偏高，制作失败，需要再作尝试。 记录显微镜观察的酵母细胞生长情况及数目，以及酒精度、残糖的变化。;参考文献;THANK YOU