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人肠型脂肪酸结合蛋白ELISA试剂盒说明书
人肠脂肪酸结合蛋白(iFABP)ELISA试剂盒分析检测说明书
樊克生物专业供应
本试剂盒仅供研究使用。?
检测范围:????48T???????25?ng/L?-800?ng/L
使用目的:?
本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本肠脂肪酸结合蛋白(iFABP)含量。
实验原理?
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人肠脂肪酸结合蛋白(iFABP)水平。用纯化的人肠脂肪酸结合蛋白(iFABP)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入肠脂肪酸结合蛋白(iFABP),再与HRP标记的肠脂肪酸结合蛋白(iFABP)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的肠脂肪酸结合蛋白(iFABP)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中人肠脂肪酸结合蛋白(iFABP)浓度。
试剂盒组成?
120倍浓缩洗涤液20ml×1瓶7终止液3ml×1瓶2酶标试剂3ml×1瓶8标准品(1600ng/L)0.5ml×1瓶3酶标包被板12孔×4条9标准品稀释液1.5ml×1瓶4样品稀释液3ml×1瓶10说明书1份5显色剂A液3ml×1瓶11封板膜2张6显色剂B液3ml×1/瓶12密封袋1个?
标本要求?
1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融?
2.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
操作步骤?
标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
800ng/L5号校准品150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液400ng/L4号校准品150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液200ng/L3号校准品150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液100ng/L2号校准品150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液50ng/L1号校准品150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液2.?加?样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样?品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。?
3.?温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
?4.?配液:将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用?
5.?洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。?
6.?加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。
?7.?温育:操作同3。?
8.洗涤:操作同5。?
9.?显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.?
10.终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。?
11.测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。?测定应在加终止液后15分钟以内进行。
注意事项:?
1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。?
2.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。?
3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。?
4.?请每次测定的同时做标准曲线,做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔孔的OD值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定,计算时请最后乘以总稀释倍数(×n×5)。
?5.?封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
?6.底物请避光保存。?
7.严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.?
8.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。?
9.本试剂不同批号组分不得混用。?
10.?如与英文说明书有异,以英文说明书为准。
保存条件及有效期?
1.试剂盒保存:;2-8℃。?2.有效期:6个月
The?performance?of?kit:?
1?sensitivity:?minimum?detection?concentration?is?less?than?1?standard.?Linearity?of?dilution.?Sample?linear?
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