第五章分子生物学研究法--dna、rna及蛋白质操作技术.pptVIP

第五章 分子生物学研究法(上) ——DNA、RNA及蛋白质操作技术 PCR的基本原理 PCR的基本原理 PCR反应条件 PCR过程 PCR的特点 PCR的基本原理 PCR反应条件 PCR过程 PCR的特点 PCR的基本原理 PCR反应条件 PCR过程 PCR的特点 PCR的基本原理 PCR反应条件 PCR过程 PCR的特点 PCR的基本原理 PCR反应条件 PCR过程 PCR的特点 PCR反应条件 PCR过程 PCR的特点 PCR反应条件 PCR过程 PCR的特点 PCR引物设计 一对引物，与3′端互补 长度：15～30个核苷酸 碱基分布随机 引物内、引物间不应有互补序列 引物与非特异扩增区无同源性 3′端必须互补 5′端可游离 逆转录过程中cDNA的合成 从真核生物的组织或细胞中提取mRNA，通过酶促反应逆转录合成cDNA的第一链和第二链，将双链cDNA和载体连接，然后转化扩增，?即可获得cDNA文库，构建的cDNA文库可用于真核生物基因的结构、表达和调控的分析； 比较cDNA和相应基因组DNA序列差异可确定内含子存在和了解转录后加工等一系列问题。 总之cDNA的合成和克隆已成为当今真核分子生物学的基本手段。 基因文库从功能上可分为：克隆文库及表达文库。 ①克隆文库由克隆载体构建。载体中具复制子、多克隆位点及选择标记，可通过细菌培养使克隆片段大量增殖。 ②表达文库是用表达载体