肿瘤相关基因与基因诊断基因治疗.ppt

目前病原体基因诊断在临床上最大的用途是 1.检测难于培养的病原体 2.在治疗中检测病毒载量以评价疗效 3.治疗过程中检测耐药基因突变 4.用于血液筛查 5.用基因分型方法进行病原体种群分类。 已通过国家药品食品监督管理局（ SFDA ）审批的基因诊断试剂 序号 试剂盒名称 1 乙型肝炎病毒（HBV）核酸扩增（PCR）荧光检测试剂盒 2 乙肝病毒核酸荧光定量检测及YMDD变异检测试剂盒 ? 丙肝病毒（HCV）核酸扩增（PCR）—荧光检测试剂盒 结核分支杆菌（TB）核酸扩增（PCR）—荧光检测试剂盒 沙眼衣原体（CT）核酸扩增（PCR）—荧光检测试剂盒 6 沙眼衣原体和淋球菌（CTNG）核酸扩增（PCR）荧光检测试 剂盒 7 人乳头瘤病毒（HIV）核算扩增（PCR）荧光检测试剂盒 ? 8 人类免疫缺陷病毒（HIV—1）核酸扩增（PCR）荧光定量检测试剂盒 9 新型冠状病毒（SARS）核酸扩增（PCR）荧光检测试剂盒 10 神经管畸形基因检测（PCR—RFLP）试剂盒 ? 11 地中海贫血基因检测试剂盒（基因芯片法) 拉米夫定治疗慢性乙肝疗效显著，但长期使用拉米夫定会出现耐药现象。使用一年、二年、三年、四年的耐药比率为 15-32% 、 38% 、 49% 、 66% 。因此，服药前期及服药期间监测 YMDD 的变化及 HBV DNA 含量就显得十分重要。拉米夫定耐药的主要原因是病毒多聚酶基因的 YMDD （酪氨酸－蛋氨酸－天冬氨酸－天冬氨酸）区域发生突变，即由 YMDD 突变为 YIDD 或 YVDD ，从而产生耐药。蛋氨酸突变为异亮氨酸 Ⅰ或 缬 氨酸Ⅴ，从而降低了拉米夫定的亲和力，减弱拉米夫定对突变病毒复制的抑制能力 病原体基因诊断的发展趋势 1 、提高自动化程度。从标本预处理、核酸提取到基因扩增和产物检测都有望实现自动化，可将人为误差降到最小，提高检测的精确度，提高工作效率。 2 、测定方法和工作程序的标准化。通过标准化改善实验室测定准确度，从而提高不同实验室间结果的可比性。 3 、在严密设计的临床应用研究基础上，确定每一个基因诊断项目适用的范围，避免滥用造成的困扰和不必要的费用。 4 、开发更加快捷廉价的检测方法 三.基因诊断在法医学中的应用 DNA指纹技术： 遗传基础是DNA的多态性 个体特征标志的序列 建立于1985年 Human genome: 3.3 billion bp with 40000 genes 1.1%: exons; (Coding region) )) 24% introns, 75% intergenic Noncoding Genome: Coding region (编码区)： 5% in human genome (1.5%). Noncoding (非编码) DNA: introns (内含子), tandemly repeated (串连重复) sequences (e.g. satellite DNA) or interspersed repeats 分散重复 (e.g. Alu element). 可变串联重复序列（variable number of tantem repeat VNTR) 5’ – ATAAACTATAAACTATAAACT – 3’ 3’ – TATTTGATATTTGATATTTGA – 5’ n （核心序列） Satellites comprise more than 40% of the genome DNA指纹技术的原理：P457 An application of repeated DNA sequences found in mammalian genomes Highly variable between individuals No two people are the same, except identical twins 1 ．高度的特异性 2 ． 稳定的遗传性： DNA 是人的遗传物质，其特征是由父母遗传的。分析发现， DNA 指纹图谱中几乎每一条带纹都能在其双亲之一的图谱中找到，这种带纹符合经典的孟德尔遗传规律，即双方的特征平均传递 50 ％ 给子代。 3 ． 体细胞稳定性：即同一个人的不同组织如血液、 肌肉、毛发、精液等产生的 DNA 指纹图形完全一致。 DNA 指纹的特点 第四节 基因治疗的策略和基本程序 基因治疗：将外源基因导入靶细胞并有效表达，从而达到治疗疾病的目的。 程序：选择治疗（目的）基因 选择