第二节、生物活性试验.PDF

始物與碘在二甲基亞碸 的存在下，進行環化及氧化作用生成5,6,7-三 甲氧-2-苯-對氧萘-4-酮 (3a )；而在純化的過程中，若用乙酸乙酯/水 萃取，則產率會大幅地降低。因此改以管柱層析法 (正己烷 :乙酸 乙酯 =3:1 )，用酒精再結晶，產率即可提高許多。 四、5,6,7-三羥-2-苯l-對氧萘-4-酮 ( 黃芩素，Baicalein，9a ) 的合成 文獻上所列舉合成黃芩素之方法，採用 Mahal 、Rai 及 Venkataraman’s 方法，產率低且所採用之起始物亦不易取得。而合成 方法二 ( Agasimundin Y. S.及 Siddappa S. ) 所述產率雖高 ( 62.5 % )，然吾等多次重複此方法，則無法製得黃芩素，因而重新自行開 發合成方法如本論文所述。本反應是以 5,6,7-三甲氧-2-苯-對氧萘-4- 酮 (3a )為起始物與氫溴酸及醋酸 ( 1：2 ) 的存在下，進行去甲基 作用，經過加熱迴流攪拌2 小時後，可得到5,7-二羥-6-甲氧-2-苯-對 氧萘-4-酮 ( 8 ) 。若將5,7-二羥-6-甲氧-2-苯-對氧萘-4-酮 ( 8 ) 繼續 加熱迴流攪拌 12 小時或更久後，可生成 5,6,7-三羥-2-苯 l-對氧萘-4- 酮 ( 9a ) 產率亦高，亦或是將5,6,7-三甲氧-2-苯-對氧萘-4-酮 ( 3a ) 直接加熱迴流攪拌 48 小時後，可得到 5,6,7-三羥-2-苯 l-對氧萘-4-酮 ( 9a )。因此利用氫溴酸及醋酸進行去甲基化時，會隨著加熱迴流攪 拌時間的長短而脫去 1 ~ 3 個甲基。另外，在去甲基化的純化過程中， 若用乙酸乙酯/水萃取，則產率會大幅地降低，因此改以直接抽氣過 濾後，利用酒精再結晶，即可提高產率。 第二節、生物活性試驗 一、細胞活性試驗 119 ( 1 ) 本論文篩選具有抗發炎活性之化合物，係以抑制一氧化氮模 式作為評估是否具抗發炎活性之依據。因此，以內毒素 ( LPS ) 處 理鼷鼠巨噬細胞株 ( RAW 264.7 ) 誘導iNOS 的表現，建立一個體 外的細胞發炎模式。由結果可知，當內毒素 ( LPS ) 的濃度增加， 細胞株產生一氧化氮的量也跟著增加；相對的，由MTT 測得的細 胞活性會降低，MTT 的結果會受細胞數目和粒腺體活性影響。細 胞死亡或是增生都會改變細胞的數目，細胞死亡可能經由細胞壞死 ( necrosis, accidental cell death ) 或是計劃性死亡 ( apoptosis, programmed cell death )或是兩者皆具。而由結果顯示，經過各種藥 物處理後可有效改善因 LPS 所造成的細胞活性下降，其提高活性 效果在 測量其細胞的存活率在濃度 100、50、25 μM 下仍然可維 持在85% ~ 100%之間，甚至於可較未加LPS 處理的控制組細胞活 性還高，即可表示這些藥物對細胞所產生的毒性很小，因此安全性 高。 ( 2 ) 由表一及表三可知，化合物 1-( 6-羥-2,3,4-三甲氧苯 )-3-苯基取 代-丙烯酮衍生物4e ~ g 及化合物 1-( 2’,4’,6’-三羥-3’-甲氧苯基 )-3- 苯基-丙烯酮衍生物13e ~ g 有顯著抑制一氧化氮生成的現象。而且 氯基是弱去活化基若同時在鄰位、對位進行取代 ( 4e ＆13e ) 的效 果較好。另外，因為氟基的陰電性最高又是弱去活化基且在對位進 行取代 ( 4g )，則抑制一氧化氮生成的能力為最優。然而化合物 4h、 4j 等具強去活化基 ( 4-COOH , 4-NO2 ) 若在間位進行取代，則抑制 一氧化氮量的能力較弱。 ( 3 ) 由表二、三可知，化合物具有鹵素取代者抑制一氧化氮量的效 果比表一化合物來得好。其中化合物12d、13e ~ g 抑制一氧化氮量 較強。