紫花苜蓿尿黑酸植基转移酶的克隆、表达分析以及遗传转化研究.pdfVIP

82—90 草业学报 第26卷第3期 2017年3月 ACTAPRATACULTURAESINICA V01．26，No．3 DOI：10．11686／cyxb2016007 姜霁珊，方志红，陈敏，王运琦，吴欣明，贾慧丽，武语迪，高洪文，王学敏．紫花苜蓿尿黑酸植基转移酶的克隆、表达分析以及遗传转化研究．草业 学报，2017，26(3)：82—90． JIANGJi—Shan，FANG Min，WANGYun—Qi，WU Hui—Li，WUYu—Di，GAO Xue—Min．Clo— Zhi—Hong，CHEN Xin—Ming，JIA Hong—Wen，WANG and of from sativaandits transformationin thaliana．Acta ning expressionanalysishomogentisatephytyltransferaseMedicago genetic Arabidopsis Prataeu[turaeSinica。2017，26(3)：82—90． 紫花苜蓿尿黑酸植基转移酶的克隆、 表达分析以及遗传转化研究 姜霁珊1，方志红2，陈敏1，王运琦2，吴欣明2，贾慧丽2，武语迪1，高洪文1，王学敏¨ 93；2．山西省农业科学院畜牧兽医研究所，山西太原030032) (1．中国农业科学INdGg,畜牧兽医研究所，北京1001 摘要：维生素E是一种人体必需，却不能自主合成的脂溶性维生索。尿黑酸植基转移酶(HPT)是维生素E生物合 成途径的关键限速酶，直接影响植物体内维生素E的总量。本实验利用同源克隆的方法，根据截形苜蓿的序列从 Blast分析结果表明，该基因编码412个氨基酸， 紫花苜蓿中克隆得到HPT基因的完整开放阅读框(ORF)。NCBI 属于异戊烯转移酶UbiA超家族。多序列比对结果表明，该序列与其他物种的HPT蛋白序列相似度高达80％，将 96．84％。通过染色体步移技术得到该基因的启动子序列，分析结果显示，该基因的启动子区域含有胁迫响应元 件、激素响应元件(脱落酸、赤霉素和乙烯)以及大量的光响应元件。实时荧光定量PCR检测结果表明，MsHPT基 因在紫花苜蓿各组织中均有表达，叶片中的表达量最高，根次之。经低温、NaCl、PEG、GA。和ABA诱导后该基因 表达均上调，表明其可能参与了植物的抗逆性调控。扩增MsHPT基因的开放阅读框，对其进行双酶切后转入双 元表达载体pBll21中，通过农杆菌介导的方式将该基因转入拟南芥。通过PCR鉴定，得到7株阳性苗。本研究为 进一步探索MsHPT在紫花苜蓿维生素E的合成以及紫花苜蓿抗逆调控中的作用奠定了基础。 关键词：紫花苜蓿；尿黑酸植基转移酶；维生素E；抗逆性；遗传转化 and of from expressionanalysishomogentisatephytyltransferase Cloning in thaliana sativaandits transformation genetic Arabidopsis Yu—Dil， Minl，WANGYun-Qi2，WU Hui-Li2，WU JIANGJi—Shanl，FANGZhi—Hon92，CHEN Xin-Min92，JIA G