实验室安全-点.ppt

2. 试剂 3%硝酸银，0.5%乙酸铅，10%三氯乙酸溶液，饱和硫酸铵溶液，10%氢氧化钠溶液，浓盐酸，浓硫酸，浓硝酸，5%磺基水杨酸，0.1%硫酸铜，饱和硫酸铜溶液，0.1%乙酸，10%乙酸，饱和氯化钠溶液，硫酸铵粉。 3. 器材 水浴锅,漏斗,滤纸,吸管,试管及试管架,量筒等。 四、实验内容 1. 蛋白质的可逆反应——蛋白质的盐析 步骤 现象 解释结论 取一支试管，加入3mL蛋白质氯化钠溶液和等量的饱和硫酸铵溶液，混匀，静置10分钟 观察有无蛋白质（球蛋白）的沉淀 过滤后，向滤液中加入硫酸铵粉末，边加边用玻璃棒搅拌，直至粉末不再溶解，直至饱和 观察有无沉淀（清蛋白）析出 静置，弃去上清液，取出部分清蛋白，加少量蒸馏水 观察沉淀的再溶解 操作 现象 操作 现象 Tube 1 ①1mL蛋白质溶液 ②3-4滴3%硝酸银溶液 ③过量的硝酸银 Tube 2 ①1mL蛋白质溶液 ②1-3滴0.5%乙酸铅 ③过量的乙酸铅 Tube 3 ①1mL蛋白质溶液 ②3-4滴0.1%硫酸铜 ③过量的硫酸铜 2. 蛋白质的不可逆反应 2.1. 重金属离子沉淀蛋白质（3支试管） 操作 现象 Tube 1 ①0.5mL蛋白质溶液 ②数滴10%三氯乙酸溶液 Tube 2 ①0.5mL蛋白质溶液 ②数滴5%磺基水杨酸 2. 蛋白质的不可逆反应 2.2 有机酸沉淀蛋白质（2支试管） 操作 现象 操作 现象 Tube 1 15滴浓盐酸 ②沿管壁加入6滴蛋白质溶液， 勿摇 ③振荡 Tube 2 ①15滴浓硫酸 沿管壁加入6滴蛋白质溶液，勿摇 ③振荡 Tube 3 ①15滴浓硝酸 ②沿管壁加入6滴蛋白质溶液， 勿摇 ③振荡 2. 蛋白质的不可逆反应 2.3 无机酸沉淀蛋白质（3支试管） 2. 蛋白质的不可逆反应 2.4 加热沉淀蛋白质 试剂 管号 蛋白质溶液 0.1%乙酸 10%乙酸 饱和NaCl 10%NaOH 纯净水 1 2 3 4 5 10 10 10 10 10 - 5 - - - - - 5 5 - - - - 2 - - - - - 2 7 2 2 - 5 取试管5支按下表添加试剂和操作（单位：滴） 操作步骤 编号 混匀 沸水浴中加热10分钟 中和 过量的酸或碱 1 Pro.+d.H2O 2 Pro.+ 0.1%乙酸 +d.H2O 3 Pro.+ 10%乙酸 +d.H2O 4 Pro.+10%乙酸 +饱和NaCl 5 Pro.+10% NaOH+ d.H2O 2.4 加热沉淀蛋白质的总结 卵清蛋白的PI(等电点) = 4.7；“+”表示沉淀；“-”表示沉淀未生成，或沉淀溶解；沉淀的多少，以“+”的多少表示 五、注意事项 实验操作强酸强碱时，一定注意自身和同学的安全，防止接触衣服、鞋和皮肤。 为观察到正常现象，需将试管洗刷洁净。 浓度较高的蛋白质溶液，实验现象更明显。 变性蛋白质一般易于沉淀，但也可不变性而使蛋白质沉淀，在一定条件下，变性的蛋白质也可不发生沉淀。 1、 蛋白质分子中哪些基团分别可以与重金属离子和有机酸作用而使蛋白质沉淀？ 2、 举例说明蛋白质变性和沉淀之间的关系。从原理上说明一个蛋白质沉淀的实用例子。 思考题 生物化学实验 张志红,付永贵 张志红TELE-mail:lsszzh@mail.sysu.edu.cn 付永贵 TEL:E-mail: fuyg@maill.sysu.edu.cn 主要内容 绪论 实验室一般规则及实验室安全 实验报告的撰写及实验成绩的评定 本学期实验内容及安排 实验一 蛋白质沉淀、变性反应 * 生物化学实验室规则（1） 1、遵守纪律，不得无故迟到、早退、大声谈笑。 2、预习，熟悉实验目的、原理、步骤。 3、严格听从教师的指导，及时记录实验原始数据。 4、实验场所整洁、公用试剂用后放回原位，实验完毕，清洗实验器皿、收拾台面，方可离开。 5、注意节约试剂，防止损坏仪器。使用贵重仪器时，严格遵守操作规程，发现故障，立即报告教师，不得擅自检修。 * 生物化学实验室规则（2） 6、乙醇、丙酮、乙醚等易燃品不能直接加热，远离火源操作及放置。 7、所有废液、废弃物等，均收集在指定容器内，不得倒在水槽内或到处乱仍。强酸和强碱不能直接倒在水槽中，应先稀释，然后倒入水槽，再用大量自来水冲洗水槽及下水道。 8、室内严禁吸烟！煤气、水管用完即关。 Long hair should be tied back to avoid burns. In addition, avoid wearing loose articles of clothing such as ties