生命科学学院本科生能力提高项目（科研训练）基金子课题-内蒙古大学.doc

生命科学学院 本科生能力提高项目（科研训练）基金 子课题概要 申请类别： 指南项目□ √ 开放项目□ 课题名称： FAK 对mTOR信号通路的调节机制研究 教师姓名： 王志钢 研究方向： 细胞信号转导 合作指导教师： 拟接收本科生年级和人数： 研究项目介绍 背景知识简介 （或训练内容） mTOR信号通路的功能 mTOR（the mammalian target of rapamycin）蛋白激酶属于PIKK（the phosphatidylinositol kinase-related kinase）超家族，作为Ser/Thr激酶而起作用，是mTOR信号通路的中心协调器。mTOR信号通路基本功能是感受营养状况进而控制细胞生长,近年的研究已将mTOR与动物生理和病理、个体发育与生长，尤其是细胞生长联系在一起[1，2]，mTOR蛋白激酶作为在进化上保守的协调器调节着基本的生物加工过程[3]。 通过基因敲除的方法证明在敲除了mTOR（mTOR-/-）的小鼠，胚胎发育到5.5天即阻滞，胚胎干细胞也被抑制[4]。同时敲除了S6K1（S6K1-/-）和S6K2（S6K2-/-）的小鼠，成活率显著降低[5]，mTOR对于早期胚胎和胚胎干细胞的生长发育是必需的[6]。它对营养信号的感受和转导对于哺乳动物胚胎发育甚至可能对出生后生长都发挥着重要的作用。在神经信号传导中，大脑通过mTOR感受营养和能量水平进而控制进食，mTORC1调节着全身的能量平衡，是下丘脑对能量水平的中心感受器[7]。mTOR可以感受来自营养、激素和Leptin(瘦素或称瘦蛋白)的信号刺激引起厌食[8]。总之，mTOR通路调节着与营养相关的生理过程。 mTOR信号通路的组成与调节机制 在哺乳动物中mTOR与其它不同的蛋白结合，形成了两种复合体mTORC1(mTOR Complex 1)和mTORC2(mTOR Complex 2)。基于过去十几年对mTORC1的研究，目前认为mTOR信号通路介导的刺激因子主要有四类，即生长因子和胰岛素，营养因子，能量及环境胁迫。已经揭示的人细胞中mTOR信号通路的基本组成包括TSC2/TSC1复合体、Rheb、mTOR、S6K1核糖体蛋白S6激酶（ribosomal protein S6 kinases ，S6Ks）和4EBP1（the eIF4E-binding protein 1，4E-BP1），其中TSC2是重要的负调节激酶，通过Rheb调节mTOR的活性。S6K1和4EBP1是最具特色的mTOR下游效应器，它们形成了两条平行的调节mRNA转译的信号通路[9]，进而调节细胞的生长和增殖。国内刘奕等（2004）首次报道了mTOR及其底物在HeLa细胞的细胞周期不同时相中的表达情况[10]，侯桂琴等（2007）报道了用特异性抑制剂和RNA干涉mTOR基因，处理后的食道癌细胞中mTOR和S6K1的活性被抑制[11]。王志钢等（2007）报道克隆了内蒙古白绒山羊的mTOR和S6K1基因[12]，这是羊细胞中mTOR信号通路研究的首次报道。 FAK与mTOR信号通路的关系 FAK（Focal adhesion kinase）是一种非受体酪氨酸激酶，它在细胞迁移、细胞骨架重排以及细胞存活中扮演着决定性的角色。它可被整合素、生长因子、机械刺激(牵拉)、高渗压等胞外因素激活 [13]。申请者在日本冈山大学的实验发现，在人肿瘤细胞中用FAK与IGF-IR的双功能抑制剂TAE226处理细胞后，mTOR的磷酸化受到抑制。这一结果预示着FAK可能是mTOR的上游调节因子。Peter T. Jindra等在对MHC类别Ⅰ信号通路的研究中发现，阻滞FAK蛋白的表达，mTOR的 Ser2448及S6的Ser235/236的磷酸化水平受到了明显地抑制 [14]但是FAK对mTOR通路调节机制并不清楚。Malik早在1996年的实验中发现，FAK在由细胞黏附斑激发S6K1活性过程中扮演重要角色，但机制不清楚[15]。Gan等（2006）的研究进一步证明，在FAK突变的293T细胞中，S6K1和4EBP-1的磷酸化受到抑制。而在敲除了TSC2的细胞中，FAK对S6K1活性的调节则被消除了[16]。这些结果显示出FAK可能是TSC2的上游调节因子，对S6K1活性的调节是通过TSC2实现的。 目前关于mTOR信号通路的功能、组成和分子机理的研究主要在人、鼠的细胞中开展，羊细胞中有关mTOR信号通路的研究还未见报道。我们的前期工作已经证明mTOR信号通路存在