大麦糜肴与发前后淀粉酶活力的测定.pptVIP

大麦萌发前后淀粉酶活力的测定;实验目的 ;实验原理 ;淀粉酶活力大小可用其作用于淀粉的水解产物麦芽糖及其它还原糖与3，5-二硝基水杨酸（DNS）的显色反应来测定。还原糖作用于黄色的3，5-二硝基水杨酸生成棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。在一定范围内，其颜色深浅与淀粉酶水解产物的浓度成正比，可用麦芽糖（或葡萄糖）浓度表示，用比色法测定淀粉生成的还原糖的量，以单位重量样品在一定时间内生成的麦芽糖的量表示酶活力。 休眠种子的淀粉酶活力很弱，但经吸胀萌发后，淀粉酶活力逐渐增强，并随着发芽天数的增长而增加。本实验通过测定大麦种子萌发前后的淀粉酶活力，来了解此过程中淀粉酶活力的变化。;仪器、原料和试剂 ;试剂： （1）麦芽糖标准液（1mg/ml）：称取100mg麦芽糖，用蒸馏水溶解并定容至100ml（要求严格仔细操作）； （2）0.1mol/L pH5.6的柠檬酸缓冲液： A液（0.1mol/L柠檬酸）—称取分析纯柠檬酸21.01g，用蒸馏水溶解并定容至1L； B液(0.1mol/L柠檬酸钠)—称取柠檬酸钠29.41g用蒸馏水溶解并定容至1L； 取A液55ml与B液145ml混匀，即为0.1mol/L pH5.6的柠檬酸缓冲液； （3）1%淀粉溶液：称取1g淀粉溶于100ml 0.1mol/L pH5.6的柠檬酸缓冲液中。 （4）3，5-二硝基水杨酸（DNS）：精确称取1g 3，5-二硝基水杨酸溶于20ml 2M氢氧化钠中，加入50ml蒸馏水，再加30g酒石酸钾钠，待溶解后用蒸馏水定容至100ml，盖紧瓶塞，防止CO2进入。若溶液混浊，可过滤。;实验步骤;麦芽糖标准曲线制作 取 7 支干净的具塞刻度试管，编号，按表加入试剂： 置沸水浴中加热 5min 。取出冷却，用蒸馏水稀释至 25 m1 。混匀后以1号管为对照用分光光度计在 520 nm 波长下进行比色，记录吸光度。以吸光度为纵坐标，以麦芽糖含量（ mg ）为横坐标，绘制标准曲线。;4．酶活力测定：取25ml刻度试管5支，编号，按下表要求加入试剂。摇匀，置于水浴中煮沸 5 min , 取出后流水冷却，加蒸馏水定容至 25m L 。摇匀，以5号管为对照在 520 nm 波长下比色，记录光密度值，从麦芽糖标准曲线中查出麦芽糖含量，用以表示酶活性。 ;试管标号 试剂 加入量/ml;计算;注意事项 ;思考题