血清钟氍与蛋白聚丙酰胺凝胶电泳.pptVIP

 聚丙酰胺凝胶电泳（polyacrylamide gel elecropmoresis , PAGE），具有分子筛和电泳的双重作用，它的分辨率高，以此为电泳载体，可以将血清脂蛋白各组分分离。 聚丙酰胺凝胶：丙烯酰胺（acrylamide,Acr，称为单体）和甲叉双丙烯酰胺（Bis，称为双体或交联剂）在催化剂的作用下，经聚合交联形成含亲水性酰胺基侧链的脂肪族长链，相邻两链经甲叉桥交联起来而形成三维网状结构。; O; 血清中脂类物质均与血清载脂蛋白结合成水溶性的蛋白形式存在。各种脂蛋白中所含载脂蛋白的种类和数量不同、颗粒大小也相差较大，可由聚丙烯酰胺凝胶电泳将其分离。 在本实验中，用乙酰苏丹黑（脂类染料）和脂蛋白结合，染成黑蓝色，因此在电泳后不必染色，即可直接清楚地观察电泳图谱，进行组分分析。;二、操作步骤:;(2)浓缩胶的制备 20%丙烯酰铵溶液 1.8ml 凝胶缓冲液 1.2ml 蒸馏水 7.0ml 50%TEMED溶液 0.05ml 置小烧杯中,混匀,再加入10%过硫酸铵溶液0.15ml,混匀,将分离胶上层的水倒去,加入配制好的浓缩胶溶液,至红色背景上线处,插入加样梳, 聚合30分钟.;2.加样 聚合后,将凝胶板捏紧拔出,短玻璃朝内,夹紧,小心拔去加样梳.用微量进样器吸取样品,加入凝胶的每个凹槽中. 3.电泳 在电泳装置的左,右槽中分别注入Tris-甘氨酸缓冲液,样品端接负极(短玻璃的一边),电流控制在40-50mA,电泳至样品分成四条带. ;