动物实验研究方法及其在中医研究中的应用.pptVIP

四、展望 通过几十年的探索，中医的实验动物，尤其是证动物模型研究取得了空前的成就，同时，也暴露出了一些问题，主要表现在： 1．动物模型很难用四诊方法加以判别。 2．造模因素选择缺少标准。 3．有的造模设计，忽视临床实际，刻意去追求证，脱离病去制造证，而不是在病，尤其是常见病的模型上去区分证。 4．关于方药的反证问题。 综上所述，动物实验是一条深入探索研究中医理论的科学内涵，提高临床诊断和治疗效果的十分重要的途径。同时也为中药药理深入研究和打入国际市场具有重要意义。今后的努力方向，重点应放在寻找、挖掘证的特异性客观性指标（外在指标、实验室指标或指标群），以及不断创新、研制、应用新的证的动物模型，尤其是病证结合的动物模型。可以预计，随着这些工作的深入中医药研究将如虎添翼，长足发展。 另外一条，可以选择那些个体差异大的实验动物，如果实现了以上辨证方法，那么，这将成为辨证论治的非常理想的动物模型。对不对？ 图4 早期荷瘤昆明种小鼠 图5 中期荷瘤气虚小鼠 图6 中晚期荷瘤气虚小鼠 图7 中晚期荷瘤阴虚小鼠 图8 晚期荷瘤阴阳两虚小鼠 以下为不同组别荷瘤小鼠爪： 图11 爪消瘦而略红 图12 爪淡掌略胖 图9 正常小鼠爪 图10 爪淡伸展无力 以下为编号为H9荷瘤小鼠不同日期拍摄的爪： 图15 肿瘤接种第2周 图16 肿瘤接种第2.5周 图13 肿瘤接种第1周 图14 肿瘤接种第1.5周 二、正常小鼠存在体质差异/证候差异 图17 正常昆明种小鼠后爪 图18 偏虚证的正常昆明种小鼠后爪 图19 正常昆明种小鼠后爪R值的正态分布 图20 正常昆明种小鼠体重的正态分布 三、小鼠如何问诊 人、鼠对话是困难的，但是问诊所期望采集的信息却大多是可以获得的，而且部分信息的完整性、可靠性还优于普通临床上的问诊。 为什么呢？众所周知，问诊归纳起来是十问：一问寒热二问汗，三问头身四问便，五问饮食六胸腹，七聋八渴俱当辨，九问旧病十问因，还要参考服药。临床上，患者的一般情况也是问诊的重要内容。对此，小鼠可以通过以下途径实现： 1. 问寒热。小鼠畏寒，往往表现为扎堆，饲养中可以观察到；畏寒的另一特点是畏寒的局部体表温度下降，通过体表红外成像数码拍摄和图像处理，可以精确定量；而体内和体表温度的改变，可以分别通过肛温、腋温、尾温、爪温检测获得。因此，以上检测可以很好地达到问寒热的主要目的，而且部分实现了量化。 2. 问汗。有报道尝试通过特殊染色技术，检测爪面出汗点和数量多寡；有的实验观察了皮毛潮湿的程度，部分弥补了问汗的困难。 3. 问头身。头身的感受可以综合两个方面的信息获得：1）造模方法，如果这些方法在临床上可能造成头身证候的，比如头颅手术、高血压、感冒等，可以参考；2）小鼠旷场自主探究和活动、抖拢检测，如果头身痛楚，则小鼠活动和探究频率和幅度会减少。 4. 问便。饲养可以直接观察大便的数量和质量，小便可以通过代谢笼完整回收，观测其数量和性状。 5. 问饮食。摄食量和饮水量可以精确测量，啮齿频率（通过声音采集与分析）可以部分反映其脾胃健康与否。 6. 胸腹。方法类似于问头身。 7. 聋。生理学有听觉反应检测，可以采用；小鼠旷场、抖拢检测可以观察小鼠反应的灵敏与迟钝，间接反映其听觉。 8. 渴。饮水量的精确测量，以及结合代谢笼尿液收集数量、颜色，判断其可能水分通过呼吸、汗液、尿液代谢的途径：阳热盛往往表现为饮多而尿少且赤；下消则饮一溲一，等等。 9. 问旧病。实验动物的疾病遗传，以及疾病或证候造模方法是明确的，而临床却往往做不到。 10. 问病因。同上，而且造模药物干预过程也是明确的。 11. 参服药。治疗干预记录是十分明确的。 12. 一般情况。包括动物购入和实验日期、品系、月龄、性别，饲养、繁殖背景等均是明确的。 因此，小鼠虽然难以实现传统意义上的问诊，比如疼痛的性质或持续时间，但问诊许多重要内容，却是可以详细、准确获得的。而且，大多可以精确地定量，因而其可靠性、准确性往往还要优于通常意义上的临床问诊。 四、小鼠如何望诊 1. 望面色 以下图右是正常小鼠，肿瘤虚证小鼠在左侧。从图中可以看到，正常小鼠头部上抬，直视相机镜头，很关注；眼裂宽，眼色红润、有神；吻部饱满、红润；肿瘤虚证小鼠则相反，头低垂、目光呆滞，失去了好奇；双目色暗；吻部瘦削、色暗滞。 21 正常与肿瘤小鼠面容与体态 2. 望舌 清醒状态下，小鼠舌不易自主伸出，如果强迫其伸出，必然严重干扰气血运行，不符合中医四诊原则。当小鼠麻醉