植物组织培养最版.docVIP

植物组织培养复习 一．绪论 1、植物组织培养的概念 答：广义上是指无菌条件下，在特定的培养基上对离体的植物器官、组织、细胞和原生质体甚至包括完整植株进行培养的技术。 狭义指对植物体组织或由植物器官培养产生的愈伤组织进行培养直至生成完整植株。 应用和意义 答：（1） 优质种苗的快速无性繁殖： 无性繁殖作物及不易繁殖作物的快速繁殖 通过茎尖培养生产脱毒健康种苗：如草莓、香蕉、 甘蔗、马铃薯、大蒜等。 （2）用于植物遗传育种 种质资源离体保存； 花粉花药培养产生单倍体； 胚乳培养产生三倍体； 胚培养拯救杂种胚克服远缘杂交障碍； 原生质体培养进行体细胞杂交； 植物体细胞无性系变异诱导和筛选； 用于植物基因转移操作等。 （3）大规模植物细胞、组织和器官培养生产次生代谢物质； （4）用于植物生长发育理论研究，包括生理学、病理学、胚胎学和细胞与分子生物学等。 实验室及基本操作 1外植体灭菌过程 答：a、、、、、、pH值）、培养条件（光强、温度）。 3植物细胞融合技术，过程 答：（1）聚乙二醇(PEG)诱导法 特点：融合频率高； 可重复性强； 诱发融合无特异性； 毒性较低。 诱导方法：第一步：器具灭菌； 第二步：原生质体制备； 第三步：配制PEG溶液； 配制PEG液： 　 PEG(MW=6000) 30%（w/v) CaCl2.2H2O 　 0.01mol/L KH2PO4 0.00074mol/L  干露醇 0.1 mol/L  调pH 5.8-6.2 ； 用时现配！ 第四步：融合处理。将2种不同原生质体以适当比例混合，取一滴于培养皿底部，在原生质体小滴上及周围轻轻加上PEG溶液，处理10-30min，使原生质体粘连融合。 第五步：清洗。用清洗液（配制清洗液：0.01mol/L CaCl2.2H2O 和0.1 mol/L干露醇），再用液体培养基清洗即可培养。 第六步：培养。 注意事项： PEG相对分子量要求大于1540； 稀释液可以用Mannitol也可以用高钙高PH液； 双亲的原生质体最好选用外观能区分开的两种细胞； 操作过程中要求动作迅速，结束后要轻拿轻放。 （2）高Ca2+-高pH诱导法 （3）电融合诱导法 第九章离体快繁 1.什么是植物离体快繁 就是利用组织培养的技术对外植体进行离体培养，使其短期内获得遗传性一致的大量再生植株的方法。 2初代培养：从植物体上分离下来的第一次培养 3继代培养：将初代培养长出的芽、愈伤组织等经切割分离后接到新培养基上进行培养 4生根培养：把芽苗接种到生根培养基上进行培养直至生成完整植株的过程 5植物快繁器官形成方式 答：短枝发生型 丛生芽发生型 不定芽发生型 胚状体发生型 原球茎发生型 6植物离体快繁的特点 答：繁殖效率高，繁殖速度呈几何级数增长； 培养条件可控性强； 管理方便，有利于植物的工厂化生产； 节约空间； 有利于种质资源的保存和交换。 7污染原因及防治办法 答：（1）外植体灭菌不彻底 培养室环境不清洁 培养基及各种接种器皿灭菌不彻底 超作时人为带入 （2）防止污染措施： 外植体灭菌要彻底； 培养基及各种接种器皿灭菌彻底； 无菌操作要求规范； 定期清洗或更换超净工作台过滤器； 培养室环境清洁，定期用福尔马林等熏蒸灭菌。 8外植体褐化原因？ 答：（1）可能原因： 植物种类和品种不适应； 外植体的年龄过大，损伤程度过大； 培养基中盐浓度和激素浓度过高； 培养条件中光强过强、温度过高，培养时间过长。 （2）防止褐化措施 在冬春季节选择分生能力强的外植体； 降低培养基中盐浓度和细胞分裂素浓度； 培养光照、温度、培养时间合适； 培养基中添加抗氧化剂或吸附剂等； 9外植体玻璃化原因 （1）可能原因： 培养基的琼脂或蔗糖浓度太低; 细胞分裂素浓度(乙烯浓度或铵态氮)浓度过高； 培养温度过高或光照不足再加上高温； 培养瓶中气体恶化。 （2）防止措施 提高培养基的琼脂浓度，增加培养基的硬度； 提高蔗糖浓度，降低培养基的渗透压； 降低培养基细胞分裂素浓度或铵态氮浓度； 利用透气性好的封口膜，降低培养瓶空气湿度； 降低培养温度或增加光照强度； 添加抗生素或添加物。 10降低商业化生产成本及提高效益的方法 答：（1）提高操作的熟练程度及劳动生产率，节约开支。 （2）正确使用仪器设备，延长使用寿命，减少维修费。 （3）降低器皿的消耗，使用廉价的代用品。 （4）节省水电开支，充分利用培养室空间等。 （5）降低污染率，提高繁殖系数、生根率、移栽成活率。 （6）以绵白糖代替蔗糖，自来水代替蒸馏水。 第十章 1植物茎尖脱毒过程： 2脱毒植