第七章经典免疫学技术黑白般.pptVIP

凝集反应特点 1．凝集反应中抗原颗粒较大抗原，长期静置或离心沉淀可自然下沉 ２．凝集反应中凝集块主要由抗原形成，而在沉淀反应中，沉淀物主要由抗体形成 ３．凝集反应：需稀释免疫血清中的抗体，使抗体分子不致于过多；沉淀反应：为了不使抗原过多则需稀释抗原 * 直接凝集反应（direct agglutination） 肥达氏反应（Widal reaction）：一种试管凝集反应。用已知的伤寒杆菌O、H抗原和甲、乙型副伤寒杆菌H抗原，与病人血清作定量凝集试验，以测定患者血清中无相应抗体存在，作为伤寒、副伤寒诊断的参考。 * 血型检测 细胞膜表面 血清中 A型： A抗原 抗B抗体 B型： B抗原 抗A抗体 AB型：A和B 抗原 无抗A和抗B抗体 O型： 无A和B抗原 有抗A和抗B抗体 * 间接凝集反应（indirect agglutination） * 反应类型 （1）正向间接凝集反应（forward indirect agglutination） （2）反向间接凝集反应（reverse indirect agglutination） （3）间接凝集抑制反应（indirect agglutination inhibition test） * 间接凝集抑制反应 * 病毒的血凝 粘病毒、痘类病毒、呼吸道肠道病毒、某些腺病毒等 * 桥梁凝集反应 * 共同凝集反应 * 玫瑰花环种类 * 玫瑰花环试验（rosette test） * 经典免疫学技术 一. 沉淀反应 二. 凝集反应 三. 补体参与的抗原抗体反应 四. 中和反应 * * 补体参与的抗原抗体反应 利用补体作为一种通用试剂来检测反应体系中抗原抗体复合物的存在，并利用补体对红细胞的裂解作用，通过红细胞的变化可以很容易地对反应进行示踪。 * 溶血试验（hemolytic assay） 1942年Rutstein和Walker建立了测定血清中总补体活性的方法。 即根据能使反应体系中50%的致敏绵羊红细胞发生溶血的血清的量，计算出每毫升血清中补体的含量。 血清中每毫升补体含量（单位）=1/血清用量×稀释倍数 * 补体结合试验（complement fixation test，CFT） 1906年Wasermann就将其应用于梅毒的诊断，即著名的华氏反应。 * 被动红细胞溶解试验（passive hemolysis test） 将已知抗原吸附在红细胞表面，然后加入待测的抗体和补体，若待测抗体和抗原能够特异性结合形成抗原抗体复合物，就会激活补体的活性，进而造成红细胞的裂解。 * 溶血空斑试验（hemolytic plaque assay，HPA） * 间接溶血空斑试验 间接法一般用于测定溶血效率较低的IgG或IgA型抗体，反应过程中需要加入抗球蛋白抗体辅助溶血空斑的形成。 * 改良型溶血空斑试验 * 反向溶血空斑试验 * 免疫粘附血凝试验 利用补体的C3b就会与红细胞表面的CR1发生免疫粘附而出现凝集现象来有效地测定各种抗原、抗体或补体含量。 * 经典免疫学技术 一. 沉淀反应 二. 凝集反应 三. 补体参与的抗原抗体反应 四. 中和反应 * 中和反应（neutralization test） 将待测血清与一定量的病原微生物混合，经适当时间作用后，接种于动物或细胞，观察待测血清中是否存在特异性抗体以及抗体能否保护易感的试验动物免于死亡或抑制病毒对细胞的毒害作用。 * 中和反应优势 （1）直接反映了机体抗病毒的能力，具有临床参考价值 （2）中和抗体存在时间长，是流行病学研究的重要依据 （3）有严格的种、型特异性，是病毒分类的重要依据 * 中和反应的类型 1．终点法中和反应 2．蚀斑减少法中和反应 * 终点法中和反应 （1）固定病毒稀释血清法 （2）固定血清稀释病毒法 中和指数=试验组LD50/对照组LD50 * 蚀斑减少法中和反应 1952年Dulbecco把噬菌体空斑技术应用于动物病毒学，创造了病毒蚀斑技术（virus plaque formation），并使之成为病毒学研究的基本方法。 * 蚀斑减少法中和反应 * 免疫学检测技术的发展 * 第七章 经典免疫学技术 * 经典免疫学技术 一. 沉淀反应 二. 凝集反应 三. 补体参与的抗原抗体反应 四. 中和反应 * 经典免疫学技术 一. 沉淀反应 二. 凝