第一章病毒2008102313512547.pptVIP

第一篇 微生物学基础 第一章 非细胞结构的超微生物——病毒 课 后 作 业 为什么病毒性疾病治疗比较困难？结合本章内容列举三种预防病毒性疾病的方法及其原理。 病毒侵入的方式取决于宿主细胞的性质尤其是其表面结构，至少有四种方式： （1）借吞噬作用或吞饮病毒将整个病毒粒子包入敏感细胞，如痘类病毒； （2）具脂蛋白囊膜的的病毒，其囊膜与细胞膜融合或相互作用脱去囊膜，核衣壳直接侵入细胞质中，如流感病毒； （3）某些病毒粒子与宿主细胞膜上的受体相互作用，使核衣壳侵入细胞中，如脊髓灰质炎病毒； （4）有的病毒能以完整的病毒粒子直接通过宿主细胞膜穿入细胞质中，如呼肠孤病毒。 3、? 核酸复制（biosynthesis）：噬菌体核酸进入寄主细胞后，操纵寄主细胞的代谢机能，大量复制噬菌体核酸，但不形成带壳体的粒子，称为潜育期。 4、? 聚集与释放（assembly and release）： 病毒核酸的复制与蛋白质的合成是分开进行的。寄主细胞合成噬菌体壳体（T2噬菌体包括头部尾部）和核酸组合形成完整的噬菌体粒子。噬菌体粒子成熟，引起寄主细胞的裂解释放出病毒粒子。 二、病毒的溶源性 溶源性（lysogeny）：是温和噬菌体侵入细菌细胞后产生的一种特性。当温和噬菌体侵入宿主细胞后，其DNA随着宿主细胞DNA的复制而复制，但噬菌体的蛋白质不能合成，宿主细胞也不裂解，继续进行正常的分裂繁殖，在偶尔情况下，某一代中其中一个宿主细胞发生裂解释放出新的子代噬菌体，而在许多代不发生裂解的宿主细胞中又检查不到噬菌体的存在，但它们却具有产生成熟噬菌体粒子的潜在能力。人们把温和噬菌体侵入宿主细胞所引起的这种特性叫溶源性。 一 、病毒的培养特征 （一）病毒在液体培养基中的培养特征 浑浊菌悬液——接种噬菌体——透明裂解液 （二）病毒在固体培养基上的培养特征 第四节?? 病毒的培养 噬菌斑 荧光假单胞菌 噬菌斑：将噬菌体接种在敏感细菌形成的菌落上，噬菌体在接种部位进行反复感染，将宿主细菌的菌落裂解成空斑，即噬菌斑。? 二、病毒的培养基 病毒的培养基即相对应的敏感宿主细胞，要具备如下条件： 1、? 必须是活的敏感动物或是活的敏感动物组织细胞 2、? 能提供病毒附着的受体 3、? 敏感细胞内没有破坏特异性病毒限制性核酸内切酶 脊椎动物病毒的培养基：胚组织细胞、人组织细胞、人肿瘤细胞、动物组织细胞、鸡、鸭细胞、敏感动物 植物病毒的培养基：相应的敏感植株和敏感植株的组织 噬菌体的培养基：相应的敏感细菌 三、病毒的培养 （一）动物病毒的培养 动物病毒的培养方法有动物接种、鸡胚接种和组织培养技术。 1、? 动物病毒的空斑试验 （1）单层细胞的制备和培养 将动物组织切成0.5-1 mm3小块 → 洗涤 → 5%胰酶消化10-15 min → 收集细胞并计数 → 加入细胞生长液并分装 → 37℃培养2-3d （2）病毒样品的采集与制备 固体样品加液体培养基制成悬液，10000r/m 离心10 min，取上清液备用。 液体样品直接离心。 空气样品用泵抽取至长有宿主细菌的平板上，或是将长有宿主细菌的平板在空气中暴露30-60min。 纯化：40，000 – 100，000g离心场中沉降1-2 h。 （3）动物病毒的接种与观察 空斑：是原代细胞或传代单层细胞被病毒感染后，细胞被病毒蚀空形成的空斑（也称蚀斑）。一个空斑代表一个病毒。通过计数可知单位体积样品中的病毒数。 病毒空斑单位（plaque formation unit）nPFU= 空斑平均数×病毒稀释度/病毒接种量 2 、系列稀释终点 病毒的滴度：指能产生培养管中的50%CPE（细胞病理效应）的最高稀释度（即最少的病毒量），称为TCLD50（组织培养感染剂量）。 若是敏感动物，则用ID50（使50％敏感动物发生变化的感染剂量）或LD50（引起50％敏感动物死亡的致死剂量）表示病毒的滴度。 * 第一节?? 病毒的一般特征及其分类 病毒是没有细胞结构，专性寄生在活的敏感宿主体内，可通过细菌过滤器，大小在0.2μm以下的超微小微生物。 一、病毒的特点 1.个体极小。大的病毒直径在250—350nm，小的病毒直径15—30nm，大多数直径小于150nm。 2.专性寄生。本身不具备独立的代谢能力，只能在活的寄主细胞内生长繁殖，离开寄主细胞不具备任何生命特征。? ????3.没有细胞结构，只有一种核酸类型，化学组成和繁殖方式都较简单。化学组成主要是蛋白质和核酸组成的大分子化合物。 4.没有或缺乏完整的酶和能量合成系统，也没有核糖体。（依靠