高中生物 专题5 DNA和蛋白质技术 课题2 多聚酶链式反应扩增DNA片段（预）（含解析）新人教版选修1.docVIP

专题5课题2多聚酶链式反应扩增DNA片段（预） 【学习目标】 理解PCR的原理和反应过程 【知识点梳理】 一、基础知识 (一）PCR原理 1.胞内DNA复制的基本体系 参与组分 在DNA复制中的作用 解旋酶 打开DNA双链 DNA母链 提供DNA复制的模板 4种脱氧核苷酸 合成子链的原料 DNA聚合酶 催化合成DNA子链 引物 使DNA聚合酶能够从引物的3′端开始连接脱氧核苷酸 2.DNA双链方向与复制关系 （1）DNA的羟基“－OH”末端称为3’端，而磷酸基团的末端称为5’端。 （2）DNA聚合酶只能从3 ′端延伸DNA链，故DNA复制需要引物。 （3）DNA合成总是从子链的5 ′端向3 ′端延伸。 3.PCR原理 （1）DNA的热变性原理 ①变性：80－100°C的温度范围内， DNA双螺旋结构解体，双链分开 ②复性： 温度缓慢降低后，两条彼此分离的DNA链重新结合成双链 （2）耐高温的Taq DNA聚合酶 （3）缓冲液为PCR反应提供的物质 DNA模板，分别与两条模板链相结合的两种引物，四种脱氧核苷酸，耐热的DNA聚合酶，同时通过控制温度使DNA复制在体外反复进行。 二、实验操作 （一）设备及用具 1.PCR仪 一台能够自动调控温度的仪器 2.微量离心管 一种薄壁塑料管，总容积为0.5ml 3.微量移液器 用于定量转移PCR配方中的液体，其上的一次性吸液枪头用一次更换一次 （二）实验操作步骤 1.准备 按照PCR反应体系的配方将所需用的试剂摆放在实验桌上。 2.移液 用微量移液器按照PCR反应体系配方往微量离心管里面加入各种试剂。 3.混合 ①过程：盖严微量离心管口的盖子，用手指轻轻弹击管壁。 ②注意: A.离心管口的盖子一定盖严，防止实验中脱落或液体外溢。 B.手指轻轻弹击微量离心管的管壁，目的是使反应液混合均匀。 4.离心 ①过程：将微量离心管放在离心机上,离心约10s。 ②目的：使反应液体集中在离心管底部，提高反应效果。 5.反应 将离心管放入PCR仪上，设置好PCR仪的循环程序。 【课前热身】 1.有关PCR技术的说法，不正确的是（ ）A．PCR是一项在生物体外复制特定的DNA片段的核酸合成技术B．PCR技术的原理是DNA双链复制C．利用PCR技术获取目的基因的前提是要有一段已知目的基因的核苷酸序列D．PCR扩增中必须有解旋酶才能解开双链DNA【答案】【解析】A、PCR全称为聚合酶链式反应，是一项在生物体外复制特定的DNA片段的核酸合成技术，A正确；B、PCR技术以解开的双链作为模版，利用的原理是DNA复制，B正确；C、前提是要有一段已知目的基因的核苷酸序列以便合成引物，C正确；D、双链DNA模版在热作用下，氢键断裂，形成单链DNA，可见该过程不需要解旋酶解开双链DNA，D错误．有关PCR技术的说法，不正确的是（ ）A．PCR是一项在生物体外复制特定的DNA片段的核酸合成技术B．PCR技术的原理是DNA双链复制C．利用PCR技术获取目的基因的前提是要有一段已知目的基因的核苷酸序列D．PCR扩增中必须有解旋酶才能解开双链DNA【答案】【解析】A、PCR全称为聚合酶链式反应，是一项在生物体外复制特定的DNA片段的核酸合成技术，A正确；B、PCR技术以解开的双链作为模版，利用的原理是DNA复制，B正确；C、前提是要有一段已知目的基因的核苷酸序列以便合成引物，C正确；D、双链DNA模版在热作用下，氢键断裂，形成单链DNA，可见该过程不需要解旋酶解开双链DNA，D错误．引物的作用是A.打开D.NA.双链B.催化合成D.NA.子链C.提供模板D.使D.NA.聚合酶能够从引物的3’端开始复制PCR技术的原理是D.NA.复制，而D.NA.的复制需要引物，其主要原因是D.NA.聚合酶只能从3′端延伸D.NA.链因此，引物的作用是使D.NA.聚合酶能够从引物的3’端开始复制