-9-19 X染色质.pdfVIP

遗传学实验 实验1 ：小鼠减数分裂标本的制备和观察 实验2 ：性染色质标本制作和观察 实验3 ：PTC尝味实验 实验4 ：数量性状的遗传分析：人类指纹的分析 实验指导教师：赵主江 实验二 X染色质标本制作和观察 实验目的 •学习X染色质标本制作方法 •掌握X染色质(X chromatin)的形态、 数量、分布特点 # 实验材料 • 器械 – 消毒牙签（取材）； – 天平和量筒（配液）； – 染色缸和试剂瓶（染色和固定）； – 盖玻片和载玻片（制片）； – 显微镜（观察标本） • 试剂：硫瑾、HCl、甲醇、冰醋酸、醋酸钠、蒸馏水 • # 实验步骤 1. 人口腔粘膜上皮细胞X染色质标本制备 2. 人口腔粘膜上皮细胞X染色质标本观察 # 1.人口腔粘膜上皮细胞 X染色质标本制备 –取材 • 漱口几次， • 用清洁的消毒牙签的钝头从两颊部内侧或下唇轻轻刮 取少许口腔黏膜上皮细胞，连续刮取数次。 • 将刮取物涮入事先装有9ml生理盐水的刻度离心管，制 成细胞悬液 # 1.人口腔粘膜上皮细胞 X染色质标本制备 –制作标本 •离心：细胞悬液以1500rpm/min,8min,弃上清 •固定：加5ml新鲜固定液（3份甲醇 ︰1份冰醋 酸 ），吹打混匀，固定25min •离心： 1500rpm/min,8min,去上清 •制备细胞悬液：加适量固定液，充分混匀 •滴片：1滴细胞悬液于干净冰载片，冷风吹干 # 1.人口腔粘膜上皮细胞 X染色质标本制备 –染色 （硫瑾染色法） ① 水解：5M HCl溶液，室温15min ② 蒸馏水冲洗，充分去除HCl，晾干 ③ 染色：硫瑾染色15min ④ 依次用蒸馏水，70%，95%乙醇冲洗，晾干或冷 风吹干 # 2.人口腔粘膜上皮细胞 X染色质标本观察 • 先在低倍镜下找到细胞较集中而又均匀分散的细胞群，观察到蓝 黑色的细胞核。胞质和胞膜不易看见。 • 油镜观察50个可数细胞X染色质出现率 • 正常值：间期细胞核中X染色质阳性率：女性，10%-30%；男性， 低于1% 人口腔粘膜上皮细胞（示X染色质） # 注意事项 1. 刮取口腔粘膜上皮细胞时丌宜用力过大 2. 滴片时尽量使其均匀，最好能使细胞成单层分 散平铺。 3. 掌握好HCl水解和染色时间 4. 避开含有大量细菌的区域；避免不核内其他核 质凝集物等混淆。凡位亍核中间的浓染小体都 丌在计数之内 5. 计数细胞时，细胞核必须完整无缺，无皱褶， 染色均匀