2018届一轮复习人教版克隆技术课件.pptVIP

4.单克隆抗体的制备 （1）杂交瘤技术制备单抗的基本方法 ①用外界抗原刺激动物（如小鼠、兔子等），使其发生免疫反应，使B淋巴细胞产生抗体； ②利用仙台病毒或聚乙二醇等作介导，使经免疫的动物的效应B细胞与可以无限传代的骨髓瘤细胞融合； ③经过筛选、克隆培养，获得来自单一细胞的既能产生特异抗体、又能无限增殖的杂交瘤细胞克隆。 （2）过程 （3）杂交瘤技术制备单抗的优点 可以从特异抗原成分比例极少的抗原混合物中获得单抗。这是因为，经过克隆筛选，可以从产生各种不同抗体的杂交瘤混合群体中得到产生特异抗体的杂交瘤细胞。 （4）单抗的应用 单抗可作为特异探针，研究相应抗原蛋白的结构、细胞学分布及其功能。 第35讲　克隆技术 [加试题组] 考点1　植物的克隆 1.（2015·浙江9月选考测试，32）某研究小组欲将已知抗盐基因导入原生质体培育抗盐菊科植物。请回答： （1）为获得大量抗盐基因，可通过　　　　技术进行扩增，也可将其连接到　　　　上，通过大肠杆菌培养扩增。 （2）制备叶片原生质体的酶混合液中，一般含较高浓度的甘露醇，其目的是避免制备的原生质体　　　　。酶混合液需通过　　　　灭菌，才能用于无菌原生质体的制备，整个无菌操作过程需在　　　　中进行。 （3）可通过　　　　方法，直接将抗盐基因导入原生质体的细胞核。此外，还可用聚乙二醇融合、电击等方法导入。导入后的原生质体需再生出　　　　，经持续分裂获得愈伤组织，进一步分化获得再生植株并扩大繁殖。 （4）利用带有标记的抗盐基因特殊片段与从转基因植株提取的RNA进行　　　　，验证抗盐基因是否被整合到受体的细胞中并转录。通过将扩大繁殖的再生植株转接到含有　　　　的培养基，根据生长状况初步筛选出抗盐植株。 （5）为了获得大量该转基因植株，可将带腋芽的茎段转入适宜培养基中，获得大量　　　　，然后转入生根培养基中诱导生根，形成再生植株。再生植株需进行　　　　（不定项选择：A.无菌处理 B.锻炼　C.去除根部残留的培养基 D.逐步提高湿度处理）后才能移种大田。 解析　（1）抗盐菊科植物的培育采用了基因工程技术和植物组织培养等技术。在基因工程技术中，抗盐基因为目的基因，可以采用聚合酶链式反应（PCR）扩增目的基因，也可以通过将连接有目的基因的质粒导入大肠杆菌中使其扩增。（2）原生质体的制备一定要放在高渗溶液中，避免植物细胞去壁后原生质体过度吸水而胀破；酶在高温下易失活，所以酶混合液无法采用高压蒸气法灭菌，可用G6玻璃砂漏斗过滤除菌。（3）植物细胞去壁后可采用显微注射法导入目的基因。原生质体培养过程中必须首先再生出细胞壁，然后再经过脱分化形成愈伤组织，最后经过再分化形成植株。 （4）若抗盐基因成功整合并转录出RNA，则相应的RNA能够跟抗盐基因的模板链互补配对，所以可用分子杂交的方法进行鉴定，而抗盐基因成功表达的抗盐植株，则应该通过种植利用其可以耐受高浓度食盐的特性进行筛选。（5）在植物组织培养过程中，应该将带芽茎段先放在生芽培养基中得到丛状苗，然后再转入生根培养基中得到再生植株幼苗，幼苗要去除根部残留的培养基，经过逐渐降低湿度的锻炼后才能在大田定植。 答案　（1）PCR　质粒　（2）吸水胀破　过滤（G6玻璃砂漏斗）　超净台　（3）显微注射　细胞壁　（4）分子杂交　较高浓度NaCl（盐）　（5）丛状苗　BC 2.（2017·台州市选考质量评估）某科研团队利用植物细胞工程技术，把基因序列已知的抗除草剂（Bar）基因导入原生质体获得抗除草剂大豆。请回答下列相关问题： （1）对于已获得的Bar基因可以用　　　　　　技术进行扩增。图中的a过程通常使用相同的　　　　　　　酶和DNA连接酶，使目的基因与载体连接形成重组DNA。 （2）在b过程中，获得原生质体除了需要纤维素酶和果胶酶，还需要用到的试剂是　　　　。 （3）成功导入重组DNA的原生质体经脱分化形成Ⅰ　　　　　　，进而生长发育成植株。下列不属于Ⅰ细胞应具有的特征是　　　　。 A.薄壁细胞 B.细胞质丰富 C.液泡小 D.细胞核小 （4）若要判断转基因抗除草剂大豆是否成功，比较简便的检测方法是　　　　　　　。 答案　（1）PCR　限制性核酸内切 （2）（较高浓度的）甘露醇 （3）愈伤组织　D （4）用一定浓度的除草剂喷洒，观察转基因大豆的生长情况 [备考备查] 1.植物细胞的全能性 全能性：植物体的每个生活细胞都具有 上的全能性，因而都具有发育为 的潜能。 ①基础：植物体的每一个细胞都含有该物种发育所需的全部遗传信息。 ②全能性表达的条件：离体、无菌；一定的营养物质，如水、无机盐、蔗糖、维生素等；植物生长调节剂。 遗传 完整植株 ③在生物体内细胞并没有表现出全能性的原因 基因在特定的时间和空间条件下选择性表达，细胞分化为不同的组织、器官。