链球菌生物合成透明质酸的分子机理与基因工程菌构建进展.PDFVIP

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２００８，２８（４）：９８～１０２ 链球菌生物合成透明质酸的分子机理与 基因工程菌构建进展 田平芳　曲　凯　谭天伟 （北京化工大学生命科学与技术学院　北京　１０００２９） 摘要　透明质酸（ｈｙａｌｕｒｏｎａｎ，ＨＡ）是由葡萄糖醛酸和Ｎ乙酰氨基葡萄糖为双糖单位交替连接而 成的粘多糖物质。目前构建基因工程菌成为提高产量和改善品质的重要手段。从发酵菌种、操 纵子、关键酶和工程菌构建等方面，综述了链球菌ＨＡ生物合成的分子机理，分析了当前生产中存 在的问题，并提出了解决问题的方法。 关键词　透明质酸　生物合成　工程菌构建　发酵 中图分类号　Ｑ７８９ 　　透明质酸（ｈｙａｌｕｒｏｎｉｃａｃｉｄ，ＨＡ）在医疗保健、食品 Ａ组的化脓链球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓｐｙｏｇｅｎｅｓ）、Ｃ组的兽疫 和高档化妆品等领域具有广泛应用。ＨＡ是由葡萄糖 链球菌 （Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓｚｏｏｅｐｉｄｅｍｉｃｕｓ）、马疫链 球 菌 醛酸和Ｎ乙酰氨基葡萄糖为双糖单位通过 １，４糖苷 （Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓｅｑｕｉ）、乳链球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓｕｂｅｒｉｓ）、类 β ［１］ ［４］ 键和 １，３糖苷键交替连接而成的粘多糖物质 。由 马链球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓｅｑｕｉｓｉｍｉｌｉｓ）等 。Ａ组为人体 β 于直链轴上单糖之间的氢键作用，ＨＡ分子在空间上呈 致病菌，不宜作为生产菌种。Ｃ组链球菌属于非人体致 刚性的螺旋柱形，柱内侧的大量羟基产生强亲水性，其 病菌，因而适合发酵生产。除链球菌外，还有巴斯德杆 ［５］ 亲和吸附的水在螺旋柱内固定不动，因而是理想的保 菌（Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａｍｕｌｔｏｃｉｄａ）也可产生ＨＡ 。 ［２］ 　　某些链球菌在整个生长期都有荚膜，而有些链球 湿剂 。ＨＡ最早发现于动物组织，后来发现是链球菌 荚膜的主要成分，ＨＡ的生产也相应经历了组织提取 菌在对数生长期的前段产生，后段消失，或在稳定期消 和发酵生产两个阶段。与提取法相比，微生物发酵法 失，有的则根本不产生荚膜。研究发现，链球菌是否产 不受动物原料限制，适合规模化生产。随着生物合成 生荚膜与透明质酸酶（ｈｙａｌｕｒｏｎｉｄａｓｅ，ＨＡａｓｅ）有关，荚 ［６］ ＨＡ关键酶基因的克隆，构建基因工程菌成为提高产量 膜消失是由于被ＨＡａｓｅ降解 。根据是否产生ＨＡ和 并控制分子量的研发热点。与传统发酵法相比，基因 ＨＡａｓｅ，可将有荚膜的链球菌Ｃ组分为３类：（１）只产生 工程菌生产 ＨＡ的优势主要有：（１）可提高 ＨＡ产量； ＨＡ，不产生ＨＡａｓｅ；（２）ＨＡ和ＨＡａｓｅ都产生；（３）只产 （２）不产生对人体有害的物质；（３）下游分离过程相对 生ＨＡａｓｅ，不产生 ＨＡ。ＨＡａｓｅ的产生对 ＨＡ发酵生产 简化。深入理解ＨＡ生物合成的分子机理，可为工程菌 非常不利，在筛选菌种时，要注意观察菌种是否同时产 构建提供理论指导。 生ＨＡａｓｅ。研究表明，人膀胱和前列腺癌细胞的ＨＡａｓｅ 产生与否及其不同表现形式，是基因选择性剪接的结 １　生物合成ＨＡ的菌种 ［