第6章常用分子生物学技术原理.ppt

第一节 重组DNA技术 4、大部分Ⅱ型限制性内切核酸酶反应条件： Tris-HCl 50mmol/L pH7.5 MgCl2 10mmol/L NaCl 0-100mmol/L DTT 1mmol/L Volume 20-100μL Temperature 37℃ Time 1-1.5h ◆1个单位限制性核酸内切酶：在建议使用的缓冲液及温度下，在20μL反应液中反应1h，使1μg标准DNA完全消化所需的酶量。 5.同裂酶与同尾酶 同裂酶(isoschizomer):不同来源的限制性内切核酸酶识别与切割相同的核苷酸靶序列,但切点不同,这类酶称为同裂酶。SmaI和XmaI(CCCGGG)。 同尾酶(isocaudarner): 不同来源的限制性内切核酸酶识别与切割的核苷酸靶序列各不相同，但能产生相同的粘性末端，这类酶称为同尾酶。BamHI(GGATCC))和BglⅡ(AGATCT)。 能自主复制； 具有两个以上的遗传标记物，便于重组体的筛选和鉴定； 有克隆位点（外源DNA插入点），常具有多个单一酶切位点，称为多克隆位点； 分子量小，以容纳较大的外源DNA。 质粒载体 质粒载体是以质粒DNA分子为基础构建而成的基