第七章：真核生物的克隆载体.ppt

实际上，经常使用一个普通的酵母基因，一般是一个与氨基酸合成有关的酶，如LEU2基因，编码β-异丙基苹果酸脱氢酶，参与丙酮酸向亮氨酸的转化。 用LEU2基因作筛选标记，对寄主生物有特殊的要求，寄主必须是一个营养缺陷型（auxotrophic）突变体，含有一个无功能的LEU2基因。这样的寄主只有在添加亮氨酸的条件下才能生长。质粒中含有LEU2合成基因，可以在基本培养基上生长。只有成功转化了2μm质粒的细胞能够存活，形成菌落。 7.1.2 基于2μm质粒的载体——酵母游离型质粒（yeast episomal plasmids,YEps) 来自于 2μm质粒的载体称为酵母附加载体或者酵母游离型载体，YEps。YEps可以含有完整的2μm质粒，也可以只含有2μm 质粒的复制起点，如YEp13。 YEp13是一个穿梭质粒（shuttle vector），除含有2μm质粒的复制起点和选择基因LEU2外，YEp13还包含pBR322的完整序列。因此，它可以在酵母和大肠杆菌这两种宿主细胞内进行复制和筛选。 酵母游离型质粒，YEp13 为什么人们要构建这样一种穿梭载体？ 原因之一是很难完整地把重组DNA从转化后的酵母菌落中取出来。而对YEp来说不存在问题，因为YEp在酵母细胞中主要以质粒形式存在；但是对一些把自己整合到酵母染色体上的载体来说，要想从酵母细胞中提纯重组的DNA简直是不可能的。可是，