生物化学与分子生物学原理.pdf

上篇 生物化学与分子生物学原理 第一章 生物大分子的基本制备技术 Basic Techniques for Preparation of Biomacromolecules 生物大分子的制备过程包括选材、细胞破碎和细胞器分离、生物大分子提取纯化、 以及样品浓缩干燥和储存等。 物大分子的制备是一项十分细致的工作，既要设法得到 它们的纯品，又要努力保持其生物活性。有时制备一个纯度较高的蛋白质、酶或核酸， 需要付出较长时间的艰苦劳动。生物大分子制备方法的选择是以 物大分子的理化性质 为依据的（表1-1）。对于理化性质不 的生物大分子，所选用的分离提纯方法也不相 。 表 1-1 生物大分子的理化性质与分离纯化方法的选择 理化性质 分离及纯化方法 分子大小和形态 差速离心、超滤、分子筛、透析 溶解度 盐析、萃取、分配层析、结晶 电荷差异 电泳、等电聚焦电泳、离子交换层析 生物功能专一性 亲和层析 在生物大分子的制备过程中，为随时了解所用方法和条件的效果，以及提取物质 的纯度和得率，必须对所提取的生物大分子进行追踪分析鉴定。因此在提纯以前，必 须建立对所提取生物大分子相应的分析鉴定方法。 以蛋白质的分离纯化过程为例，在分离、纯化过程中，每进行一个步骤都需对所 得样品的比活性（总活性/总蛋白）、得率 （每一步骤总活性与第一步总活性的百分比， 设开始时的总活性为 100%）和提纯倍数 （每一步骤比活性与第一步比活性的比值，设 开始时为1）进行测定。一般认为所得样品的比活性和得率越高以及纯化倍数越大则效 果越好。但实际应用中往往须考虑多方面的因素来选择和确定提纯方法及步骤，如对 提纯样品纯度和活性的要求、原材料的来源、实 条件以及所用材料的价格等都是我 们要考虑的。 下面是从猪肝中提纯异檬酸脱氢酶的过程。该提取过程有六个步骤，现将每一步 骤所得样品的比活性、得率和纯化倍数等追踪测定结果列于表1-2。据此结果可判断每 一步骤的提纯效果。 1 PDF 文件使用 pdfFactory Pro 试用版本创建 炣 表 1-2 猪肝异柠檬酸脱氢酶的提纯及分析 总体 酶浓度 酶总活性 蛋白质浓度 总蛋白质量 比活性 得率 步骤 积 提纯倍数 （单位/ml） （单位） （mg/ml） (mg) （单位/mg） （%） （ml） 组织匀浆 7.00 2.85 19.95 35.50 248.50 0.080 100 1.0 氯仿抽提 5.00 3.60 20.88 19.20 111.40 0.187 105 2.3 37.5-55%硫酸 铵盐析的上清 1.50 11.25 16.87 21.40