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第三章 核酸化学 一、知识要点 核酸分两大类：DNA 和 RNA 。所有生物细胞都含有这两类核酸。但病毒不同，DNA 病毒只含有 DNA ，RNA 病毒只含 RNA 。 核酸的基本结构单位是核苷酸。核苷酸由一个含氮碱基（嘌呤或嘧啶），一个戊糖（核 糖或脱氧核糖）和一个或几个磷酸组成。核酸是一种多聚核苷酸，核苷酸靠磷酸二酯键彼此 连接在一起。核酸中还有少量的稀有碱基。RNA 中的核苷酸残基含有核糖，其嘧啶碱基一 般是尿嘧啶和胞嘧啶，而 DNA 中其核苷酸含有2 ′-脱氧核糖，其嘧啶碱基一般是胸腺嘧啶 和胞嘧啶。在 RNA 和 DNA 中所含的嘌呤基本上都是鸟嘌呤和腺嘌呤。核苷酸在细胞内有 许多重要功能：它们用于合成核酸以携带遗传信息；它们还是细胞中主要的化学能载体；是 许多种酶的辅因子的结构成分，而且有些（如 cAMP、cGMP ）还是细胞的第二信使。 DNA 的空间结构模型是在 1953 年由 Watson 和 Crick 两个人提出的。建立 DNA 空间结 构模型的依据主要有两方面：一是由 Chargaff 发现的 DNA 中碱基的等价性，提示A=T 、G ≡C 间碱基互补的可能性；二是DNA 纤维的 X-射线衍射分析资料，提示了双螺旋结构的可 能性。DNA 是由两条反向直线型多核苷酸组成的双螺旋分子。单链多核苷酸中两个核苷酸 之间的唯一连键是 3 ′,5 ′-磷酸二酯键。按Watson-Crick 模型，DNA 的结构特点有：两条 反相平行的多核苷酸链围绕同一中心轴互绕；碱基位于结构的内侧，而亲水的糖磷酸主链位 于螺旋的外侧，通过磷酸二酯键相连，形成核酸的骨架；碱基平面与轴垂直，糖环平面则与 轴平行。两条链皆为右手螺旋；双螺旋的直径为 2nm，碱基堆积距离为 0.34nm，两核酸之 间的夹角是 36 °，每对螺旋由 10 对碱基组成；碱基按 A=T ，G≡C 配对互补，彼此以氢键 相连系。维持 DNA 结构稳定的力量主要是碱基堆积力；双螺旋结构表面有两条螺形凹沟， 一大一小。 DNA 能够以几种不同的结构形式存在。从 B 型 DNA 转变而来的两种结构 A 型和 Z 型 结构巳在结晶研究中得到证实。在顺序相同的情况下 A 型螺旋较 B 型更短，具有稍大的直 径。DNA 中的一些特殊顺序能引起 DNA 弯曲。带有同一条链自身互补的颠倒重复能形成 发卡或十字架结构，以镜影排列的多嘧啶序列可以通过分子内折叠形成三股螺旋，被称为 H -DNA 的三链螺旋结构。由于它存在于基因调控区，因而有重要的生物学意义。 不同类型的 RNA 分子可自身回折形成发卡、局部双螺旋区，形成二级结构，并折叠产 生三级结构，RNA 与蛋白质复合物则是四级结构。tRNA 的二级结构为三叶草形，三级结构 为倒 L 形。mRNA 则是把遗传信息从 DNA 转移到核糖体以进行蛋白质合成的载体。 核酸的糖苷键和磷酸二酯键可被酸、碱和酶水解，产生碱基、核苷、核苷酸和寡核苷酸。 酸水解时，糖苷键比磷酸酯键易于水解；嘌呤碱的糖苷键比嘧啶碱的糖苷键易于水解；嘌呤 碱与脱氧核糖的糖苷键最不稳定。RNA 易被稀碱水解，产生 2’-和 3’-核苷酸，DNA 对碱比 较稳定。细胞内有各种核酸酶可以分解核酸。其中限制性内切酶是基因工程的重要工具酶。 核酸的碱基和磷酸基均能解离，因此核酸具有酸碱性。碱基杂环中的氮具有结合和释放 质子的能力。核苷和核苷酸的碱基与游离碱基的解离性质相近，它们是兼性离子。 核酸的碱基具有共轭双键，因而有紫外吸收的性质。各种碱基、核苷和核苷酸的吸收光 谱略有区别。核酸的紫外吸收峰在 260nm 附近，可用于测定核酸。根据 260nm与 280nm 的 吸收光度（A260 ）可判断核酸纯度。 变性作用是指核酸双螺旋结构被破坏，双链解开，但共价键并未断裂。引起变性的因素 很多，升高温度、过酸、过碱、纯水以及加入变性剂等都能造成核酸变性。核酸变性时，物 理化学性质将发生改变，表现出增色效应。热变性一半时的温度称为熔点或变性温度，以 T 来表示。DNA 的G+C含量影响T 值。由于G≡C 比A ＝T碱基对更稳定，因此富含G≡C 的 m m DNA 比富含A ＝T 的DNA具有更高的熔解温度。根据经验公式xG+C = （Tm - 69.