生物工业下游技术后问题.docVIP

以下内容全部出自12章PPT课件（共14章课件，除第十章蛋白质、多肽、抗体药物和细胞产品和最后一章糖尿病的没有课后问题） 事先声明，这一份并不是什么重点，仅仅是课后问题的解答； 希望对大家有帮助； 什么是生物工业下游技术？一般工艺过程？特点？ 生物工业下游技术： 对于由生物界自然产生的或由微生物菌体发酵的、动植物细胞组织培养的、酶反应等各 种生物工业生产过程获得的生物原料，经提取分离、加工并精制目的成分，最终使其成 为产品的技术； 一般工业流程： 特点： 1.四个原则：时间短；温度低；pH适中（选择在生物物质的温度范围内） ；严格清洗 消毒（包括厂房、设备及管路） 2.重要的独立技术体系：个体化工程过程，国家计划； 3.占成本费用的大部分： 传统发酵工业中下游部分的费用占整个工厂投资费用的６０％， 而对重组ＤＮＡ生 产蛋白质等基因工程产品，下游加工的费用可占整个生产费用的８０％－９０％； 主要技术的原理、适用范围、主要步骤、注意事项和应用实例？ 名词解释：沉降速度、澄清指数、相对离心力、密度梯度离心 沉降速度（ sedimentation velocity）： 在强大离心力作用下,单位时间内物质运动的距离。 当ρp ＞ρm，则S＞0，粒子顺着离心方向沉降。 当ρp ＝ρm，则S＝0，粒子到达某一位置后达到平衡。 当ρP＜ρm，则S＜0，粒子逆着离心方向上浮 澄清指数（K系数k factor）： 描述在一个转子中，将粒子沉降下来的效率，即溶液恢复成澄清程度的一个指数； K系数越小，则越容易，也愈快将颗粒沉降 （如已知粒子S为80S，转子的K系数是323，那么预计T（沉降时间）＝k/S＝4h）； 相对离心力（RCF, relative centrifugal force）： 实际离心加速度转化为重力加速度的倍数， “ x g ”。 只要RCF值不变，一个样品在不同的离心机上获得相同的结果。 密度梯度离心： 又称区带离心（rate zonal centrifugation）包括差速区带离心（rate zonal centrifugation） 和平衡区带离心（isopychic）:等密度离心； 差速离心—最常用； 原理：利用不同粒子在离心场中的沉降速度的不同，通过不断增加相对离心力，使 一个非均匀混合液内不同大小性状的离子分步沉淀。 方法：离心后倾倒上清液与沉淀分开。 缺点：分辨率不高。 适用：粗制品的提取。 差速区带离心（rate zonal centrifugation）： 原理：各组分由于沉降系数的差异产生与组分对应的区带。 方法：先装入密度梯度介质，待分离样品铺在梯度液的顶部。 常用介质：蔗糖 适用：不完全沉降，应用在物质大小相异而密度相同的情况。 缺点：严格控制离心时间。离心时间过长，所有的样品可全部到达离心管底部； 离心时间不足，样品分离不完全。 平衡区带离心(等密度梯度离心)： 原理：依赖于样品颗粒的不同密度来进行分离。 方法：离心前预先配制介质的密度梯度，也可依靠离心力来形成梯度，样品可铺在 梯度液之上、之下或混在一起。 常用介质：CsCl 适用：蛋白质、核酸等大分子物质的分离。 缺点：处理量小、限实验室规模。 过滤与分离技术的比较？ 过滤 分离 原理 依据过滤介质的孔隙大小进行分离 在离心产生的力场作用下，加快颗粒的沉降 特点 大颗粒固体分离，操作简单，适工业应用 颗粒小，热稳定性差物质回收，实验室适用 缺点 速度慢，分离效果差异大，劳动强度大 操作成本高，产量小，效率低 应用 丝状菌（霉菌、放线菌）等 1～10um单细胞的细菌、酵母菌 离心机的分类？ 按作用原理分：沉降式、过滤式离心机 按分离目的（功能）分：制备型、分析型离心机 按转速分：常速（低速）、高速、超速离心机 按操作方式分：间歇式(分批)、连续式离心机 按设备结构特点分: 管式、蝶式、螺旋式(倾析式) 简述分离人外周血单个核细胞的方法和过程？ 聚蔗糖-泛影葡胺（Ficoll-Urografin）密度梯度离心法分离外周血单个核细胞(PBMC) 目的：测定细胞免疫功能。 方法：首先要从人或动物外周血中获取有活性的细胞，如淋巴细胞、巨噬细胞、粒细胞 原理：利用密度梯度介质-聚蔗糖-泛影葡胺（淋巴细胞分离液），相