红芪多糖HPS1—D的化学结构和抗补体活性研究.docVIP

红芪多糖HPS1—D的化学结构和抗补体活性研究 红芪多糖HPS1D的化学结构和抗补体活性研究 红芪系豆科岩黄芪属植物多序岩黄芪Hedysarum polybotrys Hand. -Mazz的根，为甘肃特产名贵药材，在中医理论中红芪用于气虚乏力，食少便溏，中气下陷，久泻脱肛，便血崩漏，表虚自汗，气虚水肿，痈疽难溃，血虚萎黄，内热消渴[1]等。多糖做为红芪的主要活性成分有着特殊的生物活性，目前各种研究显示红芪多糖具有抗癌、抗衰老、抗氧化、抗肿瘤、降血糖、增强免疫力等功效[2-7]。研究表明，一些多糖还具有抗补体的作用，能够抑制补体系统过度活化引发的炎症和损伤[8]。关于红芪多糖的抗补体活性研究未见报道。本实验从红芪多糖HPS1中分离出一种均一组分，对其结构和抗补体活性进行了研究。 　　1 材料 　　BP211D 型与BS224S 型电子天平本文由论文联盟http://www.LWlm.cOM收集整理（德国Sartorius 公司）；UV-1700紫外-可见分光光度计（日本岛津公司）；DHG-9075A 型电热恒温鼓风干燥箱（上海一恒）；KQ-3200DE 超声波仪器（江苏昆山公司）；BS-100N 自动部分收集器，BT100N数显恒流泵（上海青浦沪西仪器厂）。CR22G离心机（日本日立）；Freezone 6PWS 型真空冷冻干燥仪（美国LABCONCO）；透析袋（截留相对分子质量3500，美国科技发展公司）；multi EA 4000 元素分析仪（德国Elementar Analysensysteme 公司）；Dawn Heleos型十八角度激光散射仪（美国怀雅特技术公司）；Waters 600 高效液相色谱仪（美国Waters 公司）UltrahydrogelTM 1000，500 色谱柱（美国Waters 公司）；GC 2014 型气相色谱仪（日本岛津公司）；GC-450， MS-320（美国Varian 公司）；OV-101毛细管色谱柱（兰州中科安泰分析科技有限责任公司）；600 MHz Inova 600 NB 核磁共振波谱仪（德国Bruker 公司）；Well scan MK3 型酶标仪（Thermo Labsystems 公司，芬兰）。单糖对照品：葡萄糖（ Glc， Service 公司） 、甘露糖（Man， Dr. Ehrentorfer 公司） 、木糖（Xyl） 、半乳糖（Gal）为BioSharp 公司产品、鼠李糖（Rha）等为国产AR级。溶血素14 000 Sigma 公司（ 美国）；三氟乙酸（TFA）与二甲基亚砜（DMSO）购自Merck公司。纯水用Milipore 2Q超纯水系统制得。2%绵羊红细胞、豚鼠血清均来自兰州大学实验动物中心。 　　红芪样品购自甘肃武都，经兰州大学药学院马志刚教授鉴定为多序岩黄芪H. polybotrys的根。干燥、粉碎后备用。 　　2 方法 　　2.1 提取与分离纯化 粉碎的红芪药材，用95%乙醇回流3次，后用60 水提取3次，提取液浓缩至生药浓度1 gL-1，加入95%的乙醇至乙醇浓度达到30%，在4 静置过夜，离心，收集沉淀，冷冻干燥得红芪粗多糖1（HPS1）。HPS1经Sevage 法脱蛋白[9]和H2O2除色素[9]后再次醇沉，透析，冷冻干燥。用水溶解后，经DEAE-cellulose 52 柱色谱（2.6 cm 70 cm），用0.1 molL-1 NaCl洗脱，苯酚-硫酸法示踪，收集主要馏分，后经Sephadex G-100（2.6 cm90 cm） 柱色谱，蒸馏水洗脱，得到HPS1-D均一组分。 　　2.2 多糖的理化性质 总糖质量分数的测定用苯酚硫酸法[10]，蛋白质含量测定用Bradford 法[11]；糖醛酸的鉴定与质量分数测定使用气相色谱法和硫酸-咔唑法[10]；全波长紫外扫描；多糖中碳（C）、氢（H）、硫（S）元素分析采用元素分析仪进行分析。 　　2.3 单糖组成分析 取HPS1-D样品10 mg，采用GC分析[12]单糖组成。混合的单糖对照品直接乙酰化后GC分析。 　　2.4 部分酸水解[10] 取样品HPS1-D 100 mg用0.1 molL-1 TFA 100 水解1 h，冷却至室温后于60 减压旋蒸除去TFA，加入1.5 mL甲醇溶解，减压蒸干，重复3次，除尽TFA。用蒸馏水溶解，透析（3500）。袋内部分经Sephadex-100柱色谱纯化后得到次级多糖组分HPS1-D-H；袋外部分经Sephadex-25柱色谱纯化得一低聚糖HPS1-D-L和混合的单糖组分。将HPS1-D-H，HPS1-D-L水解后进行GC分析。 　　2.5 甲基化分析 按Needs法[13]对HPS1-D进行甲基化反应。经IR分析检测甲基化完全后，用88%甲酸100 水