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深圳市伯劳特生物制品公司 幽门螺杆菌免疫印迹试剂盒 简要介绍及实验操作过程 幽门螺杆菌免疫印迹试剂盒 简要介绍及实验操作过程 医疗器械注册证 医疗器械产品生产制造认可表 生物制品检定报告书 前　言 20世纪医学界的一个重要事件，一个医学工作者怀疑和寻求了一个多世纪的微生物——幽门螺杆菌终于被发现了！幽门螺杆菌的发现和分离培养成功是科学敏锐性和勤奋、幸运相结合的结果。这一事件成为胃肠病研究史上的一次革命，一个里程碑。从此以后，胃肠病学进入了一个新纪元。 幽门螺杆菌的发现 幽门螺杆菌（Helicobacter pylori,简称HP）HP是一种需氧菌，弧形、革兰氏阴性菌，菌体宽0.5～1.0um，长2.5～4.0um，有4～7条鞭毛。是1983年由Barry Marshall和Rodin Warrem在澳大利亚首先分离出来的。大量临床研究证明：HP感染是慢性胃炎、胃十二指肠溃疡和胃癌的重要致病因素，1994年世界卫生组织（WHO）已将其列为第一类（即肯定）的生物致癌因子。 在临床上HP可分为两种类型： Ⅰ型,为产细胞毒素HP菌株，其检出率约占总HP的50％～60％，应用免疫印迹技术，显示其免疫活性蛋白区带有128、116、110、95、91、66、60、54、50、33和30KD等。其中细胞毒（Cag A）蛋白与128、116和110KD区带有关，空泡毒素(Vac A)蛋白与95和91KD区带有关，尿素酶蛋白与66、60、33和30KD区带有关，鞭毛蛋白与54和50KD区带有关。这类菌株能使胃上皮细胞出现空泡、变形和损害，易引起溃疡和诱发癌变。 Ⅱ型，是不产生细胞毒素的HP，即Cag A(-)和Vac A(-)株，这一类HP菌株毒性较小，感染后一般只是引起慢性浅表性胃炎而无临床症状。 世界上超过半数的人感染HP，但并不是所有的HP都产生空泡毒素，只有50%—60%具有空泡毒素活性的HP才是产毒菌株。因此对指导HP感染的治疗具有重要的意义。 HP与慢性胃炎的关系 HP与慢性胃炎的关系 HP的致病作用 HP感染与胃、十二指肠溃疡之间有密切关系 HP的致病作用 胃癌与萎缩性胃炎和肠上皮化生有密切关系，这种病理学变 化一直认为是癌前病变。 Eurogast研究小组认为，100%伴有HP感染的人群中胃癌的危 险性比无HP感染的人群增加近6倍。 1994年，世界卫生组织（WHO）已将HP列为第一类生物致癌因 子。 临床常用HP检测方法比较 免疫印迹简介 免疫印迹简介 印迹技术是本世纪分子生物学领域三大发现之一。它与内切酶的发现和PCR基因扩增技术，给人类生物工程带来了革命性进展。它的基本原理是将凝胶电泳与固相免疫结合起来，主要有三个工序： 将蛋白质经凝胶电泳按分子量大小不同依次分离； 将分离的组分转印到印迹膜上； 对转印到印迹膜的蛋白成分进行免疫学检测。 HP免疫印迹检测的基本原理 HP抗体免疫印迹检测之基本原理 本试验是将标准的HP产毒株【CagA(+)和VacA(+)】的各种抗原成分提取出来，用聚丙烯酰胺凝胶电泳按分子量大小不同依次分开，再将其转印至印迹膜上，如果被检者血清有相应抗体，应用酶联免疫反应，就会在抗原的相应位置出现显色区带，据此可判断出被检血清中各种HP抗体。根据抗体的不同可推断HP类型，根据显色带的强弱、消长可观察治疗效果，预测溃疡有无复发的可能性。 各种胃、十二指肠疾病：包括胃、十二指肠溃疡、慢性胃炎、胃癌和胃淋巴瘤等； 非溃疡性消化不良； 缺铁性贫血口服铁剂治疗效果不佳者； 儿童消化不良或不明原因的生长发育迟缓者。 禁忌症 本检查无任何禁忌症，不需要空腹可随进采血检测。 实验安全性 本检查安全可靠，无任何副作用，尤其适用于儿童、孕妇HP感染的检测。 HP抗体免疫印迹试剂盒特点 非创伤性HP检测技术； 能直接观察HP血清学反应全貌，包括了CagA、VacA和尿素酶亚单位； 国际上公认的HP标准株和质控血清确保了检测的可靠性； 方法简单，不需任何辅助设备； 检测快速，整个时间仅需2小时； 标本需要量少，仅需10微升被检血清； 特异性强（96.0%）； 敏感性高（98.4%）。 试剂盒组成（按40人份计） 幽门螺杆菌试剂盒的操作步骤 幽门螺杆菌试剂盒的操作步骤 1 在量杯中将浓缩洗涤液用蒸馏水按 1：10 的比例稀释成洗涤应用液。 2 每槽加入洗涤应用液1ml， 再加入待测血清或全血10ul， 放在摇床上摇动30分钟。（或摇动混匀1分钟后，置37℃温箱中孵育30分钟） 3 取出反应槽，弃去槽中液体，并在平铺的纸巾上将其倒置经磕以