糖胺聚糖分析测定的研究进展.PDFVIP

第 33卷 分析化学 ( FENX I HUAXU E) 　评述与进展 第 7期 　　　 　　 　　　　　 　　　　　 　 　　　　 2005年 7 月 Ch ine se Journal of Analytical Chem istry 1023～1028 糖胺聚糖分析测定的研究进展 张 　莉 　李 　娜 　赵凤林 　李克安 (北京大学化学与分子工程学院 ,生物有机分子工程教育部重点实验室 ,北京 10087 1) 摘 　要 　糖胺聚糖是一类重要的生物大分子 。综述了利用分子光谱法 、高效液相色谱法 、电泳法 、质谱法和电 化学等方法对其进行分析测定的研究进展 。 关键词 　糖胺聚糖 ,分子光谱法 ,高效液相色谱法 , 电泳法 ,质谱法 , 电化学法 ,生物传感器 ,评述 1　引　　言 糖类是含多羟基的醛类和酮类化合物 ,按结构可分为单糖 、寡糖 、多糖及复合糖等 4 类 。和蛋白质 、 核酸一样 ,糖类是一种重要的生物大分子 [ 1 ] ,是高密度的信息载体 ,而且是基因信息的延续 。大量实验 事实表明糖类参与许多生理和病理过程 ,许多疾病的发生和治疗都与其有关 。在生物有机体内多糖分 子具有广泛的生物功能 , 比较常见的有 :作为植物 、动物骨架的原料 , 能量储存形式 ,复杂的生物功能 (如血型决定簇 、细胞识别等 ) [ 2 ] 。 ( ) 糖胺聚糖 GA G 是多糖中的一种 ,是一类 由重复的二糖结构单元组成的带有负电荷的长链大分 子 。作为蛋白聚糖的一部分 ,广泛存在于脊椎动物组织的细胞外基质中。常见的 GA G有透明质酸 ( ) ( ) ( ) ( ) ( ) HA 、硫酸软骨素 CS 、硫酸皮肤素 D S 、硫酸角质素 Kep S 和肝素 H ep 6 种 。研究表明:多糖具 有许多方面的生物活性 ,多数无毒 ,是比较理想的药物 , 比如 :肝素具有抗凝血作用 ,在血渗析和体外血 循环中起到防止血液凝固的作用 ,还可防止血栓生成 。硫酸软骨素具有特殊的免疫抑制作用 ,还可防止 动脉粥状硬化 ,并在临订上用于治疗风湿痛 、关节炎 、神经痛及腰痛有较好效果 。透明质酸可增加关节 间的润滑性 ,在剧烈运动时起减震作用 ,使关节免受伤害 。近年来 ,糖类的功能研究取得了长足的进步 , 同时也对糖类分析测定提出了挑战 。文章主要介绍了近 10年内糖胺聚糖的分析测定方面的研究进展 。 2　糖类的分析测定方法研究进展 2. 1　分子光谱法 由于糖分子中的吸光基团和发光基团很少 ,给直接利用分子光谱法测定糖类带来了困难 ,普遍采用 ( ) 的是向缺乏明显的光学性质的体系中加入光谱探针 如染料 ,令体系具有某种光学性质 ,继而可以采 用分子光谱法进行研究 。由于有机染料较易得 ,而且稳定 、廉价 , 因此染料结合法成为分子光谱研究多 糖的首选方法 ,并在应用中取得了很大成功 。 2. 1. 1　紫外 可见分光光度法 　分光光度法是基于长链的多糖大阴离子能与染料阳离子之间反应引起 染料吸收光谱的变化进行分析测定的。已研究过的染料有碱性吩噻嗪染料 、碱性吩嗪染料 、碱性三苯甲 烷染料 、碱性二苯基萘基甲烷染料 、阿利新蓝以及偶氮染料等 。 研究者们考察了影响反应的各种因素 ,如离子强度 、溶剂 、温度 、干扰物质等 。实验表明 ,离子强度 增大或加入乙醇等溶剂 ,均引起溶液中游离态的染料分子增加 ,即对染料与多糖之间的作用起到了破坏 作用 。温度升高不利于染料分子间的聚合 ,也不利于染料和多糖之间的结合 [ 3 ] 。另外 ,对许多体系的 研究均表明 , 以染料作为光谱探针对多糖进行测定的选择性很好 ,大部分常见离子 、氨基酸等都不干扰 , 可用于实际样品测定 。如 : 以三苯甲烷类染料 、二苯基萘基 甲烷类染料测定肝素 ,线性范围为 0 ～2. 4 m g/L ;检出限为